刘卫 徐格致 姜春晖 田洁

　　复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 200031

　　目的：探讨糖基化蛋白对体外培养小胶质细胞的影响。

　　方法：新生SD大鼠视网膜小胶质细胞分离、培养，OX-42/GPFA染色鉴定纯度。不同浓度糖基化蛋白(glycated albumin，GA)(0，10，50，100，500，1000，2000μg/ml)刺激24小时后，倒置相差显微镜下观察其形态变化，MTT法测量小胶质细胞的活力，Iba1、TNF-alpha及IL-1beta免疫荧光染色观察其激活后表达变化。酶联免疫吸附法(ELISA)测定不同浓度GA刺激小胶质细胞6，12，24小时细胞上清中致炎因子TNF-a和IL-1β的蛋白含量。

　　结果：体外分离培养的视网膜小胶质细胞表达OX-42，纯度90%以上。分离2~3天后的小胶质细胞从圆形逐渐表现为杆状、梭型的狭长静息状态。经GA刺激的小胶质细胞从静息状态转变为圆形阿米巴激活状态，Iba1表达显著上调并从胞浆转移至胞膜皱褶上，胞浆内TNF-alpha及IL-1beta免疫荧光染色阳性，而未经刺激的小胶质细胞不表达TNF-alpha及IL-1β。MTT表明小胶质细胞未见明显增殖，2000μg/mlGA导致小胶质细胞明显凋亡。ELISA结果显示GA刺激6小时后小胶质细胞呈剂量依赖的方式释放TNF-alpha和IL-1beta，在500μg/ml时达到高峰(158.2±6.6 pg/ml，P<0.0001;261.3±11.4 pg/ml，P<0.0001)。

　　结论：GA体外可直接激活小胶质细胞，释放致炎因子;GA诱导的小胶质细胞活化模型是研究糖尿病状态下小胶质细胞激活的有效手段。