刘影 王丰 樊莹

　　上海市第十人民医院 上海市第一人民医院 200072

　　目的：以慢病毒(Lentivirus，LV)为载体介导报告基因和外源基因转移，观察其体外感染效率以及对RPE细胞的毒性作用。评价LV介导报告基因GFP和Endostatin基因眼部转移的作用效果，探讨将外源基因转入视网膜组织的可行性，为今后慢病毒载体用于眼部新生血管性疾病的治疗提供前期研究基础。

　　方法：含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)和内皮抑素(Endostatin，ES)两种外源基因及巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)和视紫红质(rhodopsin，Rho)两种启动子的LV载体，在体外感染人RPE细胞，眼内行玻璃体腔注射。通过检测细胞表达GFP的比例和荧光强度及ES mRNA水平来评价其感染效率;通过透射电镜和MTT试验，了解LV载体对RPE细胞的毒性作用。通过观察视网膜荧光来评价其在眼部的转染效果。建立小鼠ROP模型，观察新生血管的形态和数量。

　　结果：随病毒滴度增加和感染时间延长，表达GFP的RPE细胞数和荧光强度增加;随病毒滴度增加，RPE细胞内ES mRNA增加。一定剂量范围内病毒对细胞增殖及超微结构无明显影响。LV通过玻璃体腔注射介导GFP基因转移可见视网膜荧光表达。小鼠ROP模型中视网膜无灌注区形成，新生血管数量明显高于正常组。

　　结论：慢病毒能有效、特异地介导外源基因感染RPE细胞，且其表达呈剂量依赖性和时间依赖性。慢病毒在一定剂量范围内对RPE细胞增殖无明显影响。LV玻璃体腔注射可有效介导外源基因转入视网膜。小鼠ROP模型的成功构建为眼部血管生长抑制因子的转移奠定了基础。