【摘要】 目的：观察促红细胞生成素对早期糖尿病大鼠ERG影响。方法：将45只Wistar大鼠随机分成3 组,即正常对照组、糖尿病模型组和EPO干预组,链尿佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,6wk后测量ERG a波、b波及OPs潜伏期及波幅。结果：EPO干预组FERG a，b，OPs各子波OP1，OP2，OP3波峰值潜伏时与正常组比较无显著性意义(P>0.05),而与糖尿病模型组比较有显著性意义(P<0.05); EPO干预组FERG a，b波幅及OPs总波幅与糖尿病模型组比较有显著性意义(P<0.05)。结论：EPO对早期糖尿病大鼠视网膜病变具有防治作用。
【关键词】 糖尿病视网膜病变 促红细胞生成素 视网膜电图 大鼠
0引言
糖尿病视网膜病变( diabetic retinopathy ,DR) 是糖尿病严重并发症之一，是造成视力丧失和致盲的主要原因[1]。目前越来越多的实验支持在糖尿病模型建模成功后早期就发生了视网膜血管内皮的损伤[2 ,3]和神经组织代谢异常[4]，并且有学者认为糖尿病引起的视网膜神经元和(或) 神经胶质细胞的改变早于糖尿病视网膜微血管病变[5]。视网膜电图（electroretinogram,ERG）能够客观反映视网膜神经元和（或）神经胶质细胞的功能状态，研究发现糖尿病大鼠最早在2wk时ERG的振幅就比对照组减少，且糖尿病对ERG b波的影响大于对a波的影响[6]，支持了糖尿病大鼠在早期确实发生了视觉电生理功能的改变，同时近年来研究发现促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)具有重要的促神经元生长和神经元保护作用[7]，并且对早期糖尿病大鼠视网膜神经胶质细胞有保护作用[8]。本实验通过对EPO干预后早期糖尿病大鼠ERG的观察,为DR的预防和治疗提供实验依据。
1材料和方法
1.1材料 健康Wistar大鼠45只,雌雄不限，体质量200±20g,随机分为正常对照组、糖尿病模型组和EPO干预组,每组15只。链尿佐菌素( Sigma)、重组人促红细胞生成素（成都地奥九鸿制药）、视觉电生理（重庆康华公司 APS2000）。
1.2方法
1.2.1动物模型及给药 大鼠适应性喂养1wk，禁食12h，以60mg/kg链尿佐菌素( sreptozotocin ,STZ ,临用前用0.1mmol/L，pH4.2的柠檬酸柠檬酸钠缓冲液配成20g/L的溶液) 快速一次性左下腹腔注射建立糖尿病模型,给药后24h及1wk时测血糖,>16.7mmol/L者为糖尿病建模成功。干预组于造模成功1wk后按5000U/kg 剂量腹腔内注射重组人促红细胞生成素( rHuEPO ) ,2次/wk, 共6wk。
表1 实验后各组ERG a波、b波、OPs峰值潜伏时的比较（略）
1.2.2 ERG检测方法 各组大鼠于实验后测定视网膜电图(ERG)。大鼠麻醉后, 以美多丽眼液点眼散瞳, 暗适应30min, 前额皮下置参考电极, 右耳置接地电极, 大鼠角膜表面置氯化的环状银丝记录电极。FERG为白色闪光刺激,闪光强度为2.398cd·s/m2，闪光间隔为15s。通频带0.1～500Hz，扫描时间250ms，叠加次数4次。OPs为白色闪光刺激，闪光强度2.398 cd·s/m2，闪光间隔为15s，通频带100～500Hz，扫描时间250ms，叠加次数8次。测量FERG a，b峰值潜伏波时及振幅，OPs各子波的峰值潜伏时、振幅及总振幅。a波峰值潜伏时为刺激开始到a波波谷的时间，振幅为基线到波谷的电位值；b波峰值潜伏时为刺激开始到b波波峰的时间，振幅为a波波谷到b波波峰的电位值；OPs各子波（以3个子波多见）峰值潜伏时为刺激开始到各子波波峰的时间，振幅为各子波上一波谷到各子波波峰的电位值；OPs总振幅为OP1，OP2，OP3各子波振幅之和。
统计学分析：对3组ERG各波潜伏期和波幅值的比较在统计学软件SPSS 13.0版下进行计量资料方差分析及多组均数间两两比较, 以P<0.05作为差异有统计意义的判别标准。
2结果
2.1实验后各组OPs的比较 糖尿病大鼠各子波峰值潜伏时呈延迟趋势，与正常组比较有显著性意义(P<0.05)，EPO干预组各子波潜时稍延长，与正常组比较无显著性意义(P>0.05) ,而与糖尿病组比较有显著意义(P< 0.05，表1)。OPs波总振幅的测量亦显示，EPO干预组与糖尿病组比较有显著性意义(P<0.05，表2)。
2.2实验后各组大鼠ERG的比较 三组间a波波幅差异无统计学意义，而糖尿病组b波波幅显著降低，与正常组比较有显著性意义(P<0.05)，EPO干预组与正常组比较无显著性意义( P>0.05) ,而与糖尿病组比较有显著意义(P<0.05，表2)。糖尿病组a波、b波潜时明显延长，与正常组比较有显著性意义(P<0.05)，EPO干预组a波、b波潜时略有延长，与正常组比较无显著性意义(P>0.05) ,而与糖尿病组比较有显著意义(P<0.05，表1)。
3讨论
促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是组织氧合状态的一种主要的糖蛋白激素,由193个氨基酸组成,对机体供氧状况发挥重要的调控作用[9]，组织缺氧是刺激EPO合成释放的主要因素。1985年利用基因重组技术开始批量生产重组人EPO（recombinant human erthroietin, rhuEPO）,广泛用于临床[10]。传统认识中，EPO是一种作用于骨髓造血细胞，促进红系祖细胞增生、分化、成熟的内分泌激素。近来研究表明EPO具有非常重要的造血作用，尤其是发现EPO参与了缺血的视网膜神经元的保护[11]。ERG是由光照引起视网膜各种神经元电活动的综合反应，是从视网膜的细胞水平来评价视功能的,反映视网膜各个层次细胞功能状态的客观检查。ERG的 a波起源于视网膜光感受器层 ,是一种超极化动作电位 ,反映光感受器细胞的生物电活动[12]。 ERG b波一般认为起源于视网膜双极细胞[13],其变化在一定的特性方面反映视网膜内核层细胞(主要是双极细胞)的电活动,在视网膜功能的诊断上是一个可靠而灵敏的客观指标;OPs波是附加在 a波和 b波上的一系列节律性的低振幅电位,反应内丛状层到节细胞的功能，具有敏感客观反映视网膜内层血液循环状态的作用。
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