角膜结膜及泪器病             1580                                      PO0269

　　阳离子聚合物介导IL-1ra基因原位转染植片诱导移植免疫耐受

　　袁进   陈家祺   陈志士 周世有 顾建军 黄挺

　　广州中山眼科中心 510060

　　目的  探讨阳离子聚合物介导下IL-1ra基因原位转染角膜植片，诱导移植免疫耐受的效果和机理。

　　方法  以人cDNA文库为模板PCR扩增，获得hIL-1ra cDNA，构建真核表达质粒PcDNA3.1-hIL-1ra。建立Wistar-SD大鼠角膜移植排斥模型，将试验动物分为3组，每组30只。I组为对照组，不进行干预，II组在移植前24小时，向供体角膜基质注射阳离子聚合物包被的PcDNA3.1-hIL-1ra溶液20μl，III组在完成角膜移植重建前房时注射IL-ra基因转染液20μl。裂隙灯下对各组大鼠角膜植片透明时间进行比较。免疫组化检测角膜移植排斥反应前、急性排斥反应期及排斥反应后2周，各组植片中 TGF β1、ICAM-1、RANTES、CD4、CD8的表达情况，ELISAI分析植片中IL-1、IL-6的动态表达规律。RT-PCR和Western-blotting检测植片中IL-1ra蛋白和IL-1ra mRNA的表达强度。

　　结果  DNA测序、酶切电泳和蛋白免疫印迹证实构建的IL-ra基因序列正确。对植片进行原位转染后，II、III组的植片存活时间分别为12.56±1.31d、12.21±1.14d与对照组7.65±0.88d相比，差异有显著性(P<0.05)。IL-1ra基因角膜注射和前房注射后在植片均有IL-1ra蛋白和IL-1ra mRNA表达，在第7d达到峰值，持续表达时间21d，IL-ra基因治疗组的角膜植片中IL-1、IL-6、TGF β1、RANTES、ICAM-1的表达水平均明显低于对照组，两种原位转染方式之间则无统计学差异。

　　结论  阳离子聚合物介导下移植前对供体角膜预转染和移植后前房注射，可将IL-1ra基因原位导入植片组织，并且获得IL-1ra蛋白的高效表达，下调免疫分子的表达水平，减轻免疫细胞的浸润，抑制移植排斥反应。IL-1ra基因原位转染技术有望在角膜移植免疫排斥的防治中发挥重要的作用。

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