作者：丁哲 作者单位：南京中医药大学，江苏 南京 210029
【摘要】 目的：探讨夜明颗粒制剂对遗传性视网膜色素变性小鼠的作用机理。方法：取4周龄rds鼠9只，随机分为3组，夜明颗粒组4只、杞菊地黄丸组3只和对照组2只。给药28 d后取眼球，立即经10%中性甲醛固定，光学显微镜下观察水平视网膜近赤道部位光感受器细胞的厚度。结果:经夜明颗粒治疗后，光镜结果显示，rds小鼠光感受器细胞层数明显增加，与对照组和空白组比较，组间差异有显著性(P<0.05)。结论:夜明颗粒可延缓rds小鼠视网膜感光细胞凋亡的发展。
【关键词】 夜明颗粒 视网膜色素变性 rds小鼠 光镜 光感受器细胞
基金项目:江苏省高校自然科学研究计划(编号：05KJB360095) 目前视网膜色素变性(RP)的中医药治疗逐渐受到重视，现今关于中医药治疗RP的临床观察的有关报道比较多，而关于中医药治疗RP的实验研究的有关报道比较缺乏，现在已经明确感光细胞凋亡是RP的最终病理过程。因此本研究以先天性视网膜变性rds小鼠作为研究对象,观察中药复方制剂对rds小鼠视网膜感光细胞凋亡的影响，为临床中药治疗RP提供依据。
1 材料与方法
1.1 研究对象 遗传性视网膜变性动物模型rds小鼠(C3HPrph2Rd2)，4周龄9只，雄性，体重18～22 g(国家遗传工程小鼠资源库-南京大学模式动物研究所提供，合格证号：0010669，许可证号：SCXK(苏)2005—0002)。在江苏省中医院实验动物中心分笼饲养，喂以全价颗粒饲料(南京江浦县药检所实验动物饲料厂提供)，自由饮水。SPF级饲养，室温(22±2)℃，相对湿度55℃～65℃，循环光照(8 h/16 h，光照/黑暗)。
1.2 主要实验用药物 夜明颗粒(中药单味浓缩颗粒：由熟地10 g，枸杞子10 g，黄芪15 g,丹参15 g，当归10 g，制何首乌10 g，山茱萸10 g，灵芝6 g，白芍10 g，枳壳6 g等组成。江阴天江药业有限公司，批号0610124)，杞菊地黄丸(河南省宛西制药有限公司，批号060416)。
1.3 动物分组 将9只4周龄rds小鼠，随机分为3组，每组每天称体重，根据体重给小鼠灌胃：①夜明颗粒组(4只)：取夜明颗粒剂(每剂总量102 g)，分别配成1.36 g/mL浓度，按20 mL/kg给小鼠灌胃；②药物对照组为杞菊地黄丸组(3只)：取杞菊地黄丸(规格为8粒/3 g)，将其配成0.12 g/mL，按20 mL/kg给小鼠灌胃；③空白对照组(2只)：将蒸馏水按20 mL/kg给小鼠灌胃。连续4周(28 d)灌胃后，将3组小鼠处死。
1.4 光镜观察 颈椎脱臼术处死小鼠，立即摘取眼球，置于10%甲醛溶液中固定24 h后,经角膜缘切开取出晶状体，放50%酒精1 h，常规脱水、石蜡包埋(包埋时眼球水平放置)。
1.5 计数方法 细胞层计数对每一完整片段上，等距离作6次层数计数,计算平均值。细胞计数在400×的照像图片统一转成21 cm×16 cm大小图片显示在液晶屏幕上,取直径2 cm的圆环计数该范围内细胞核数，每一完整片段上计数2个区域。
1.6 统计学处理 采用SPSS10.0软件包进行统计学处理，计量资料采用t检验。
2 结果
8周龄空白组rds小鼠视网膜经HE染色显示，外核层与内核层分界清晰,外核层厚度约(9.12±1.43)层。4周龄rds小鼠经4周的杞菊地黄丸干预治疗，外核层厚度约(9.55±0.95)层;4周龄rds小鼠经过4周的夜明颗粒干预治疗，外核层厚度约(10.42±1.54)层。由表1和图1～图3可知，4周rds小鼠经过4周的夜明颗粒干预治疗，结果表明，夜明颗粒可延缓rds小鼠视网膜外核层层数的减少。
4周龄rds小鼠经夜明颗粒治疗28 d后，与药物对照组和空白对照组的病理比较，视网膜外核层细胞层数增加。4周龄rds小鼠经4周的杞菊地黄丸干预治疗，外核层细胞数约34.65。4周龄rds小鼠经过4周的夜明颗粒干预治疗，外核层细胞数约37.80。结果表明，夜明颗粒可延缓rds小鼠视网膜外核层细胞数的减少。
表1 夜明颗粒对rds小鼠视网膜外核层层数的影响(±s)组 别n4周空白组29.125±1.4303(8) 杞菊地黄丸组39.55 ±0.9474(10) 夜明颗粒组4 10.416±1.5393(10)* 注：单侧检验 与空白组相比较*P<0.05；与杞菊地黄丸组相比较，☆P<0.05。
表2 夜明颗粒对rds小鼠视网膜外核层细胞数的影响(±s)组 别n4周空白组236.70±1.2454(10) 杞菊地黄丸组334.65±1.0436(10) 夜明颗粒组437.80±1.3421(10)☆ 注：单侧检验与空白组相比较,*P<0.05；与杞菊地黄丸组相比较,☆P<0.05
3 讨论
视网膜色素变性(RP)属中医的“高风内障”范畴，因先天不足，肝肾亏虚或脾肾阳虚，致使气血不利，目络瘀阻而致，因此对本病的治疗多采取补虚祛瘀相结合的原则［1］。夜明颗粒由补益肝肾，益气活血，通络开窍的中药组成，方中熟地、枸杞子、白芍、山茱萸、黄芪、灵芝、何首乌具有清除自由基的作用，而丹参、当归具有改善微循环的作用。目前已完成了夜明颗粒对RP的临床研究和相关的实验研究，结果证实其在临床上用之有效［23］，实验研究结果亦表明夜明颗粒可以改善微循环及血液高黏状态，能清除体内自由基及增强机体抗氧化能力［24］。
【参考文献】
［1］谢立科,李传科,黄少兰.视网膜色素变性研究及中医治疗的现状［J］.中国中医眼科杂志,1998,8(3):189191.
［2］丁淑华,高卫萍,朱宣宣,等.夜明颗粒治疗视网膜色素变性的临床及实验研究［J］.南京中医药大学学报,2000,16(4):206208.
［3］汪国智,丁淑华.夜明颗粒治疗视网膜色素变性52例［J］.实用中医药杂志,2006,22(12):768769.
［4］高卫平,丁淑华,朱萱萱,等.夜明颗粒对小鼠微循环和大鼠血黏度影响实验研究［J］.南京中医药大学学报,2005,21(3):166167. |
