作者：刘玉福
作者单位：（100005）中国北京市，首都医科大学附属北京同仁医院；（100730）中国北京市眼科研究所
【摘要】目的：为研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及其受体抗体对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells, HLECs)超微结构的影响。
方法：采用透射电镜观察正常HLECs及bFGF作用后及受体抗体阻断bFGF在HLECs作用的超微结构变化。
结果：正常HLECs胞内较多的线粒体、粗面内质网和游离核糖体及少量微丝结构，核膜完整，染色质均匀。bFGF作用后表现为细胞膜完整，膜局部突起较多，线粒体和游离核糖体明显增多，基质较致密，细胞核附近有较多微丝结构，核膜完整，染色质均匀，核仁增大。bFGF受体抗体阻断作用后表现为细胞突起消失、细胞膜明显破坏，大量线粒体空化，嵴消失，基质减少，呈云雾状退化，内质网明显减少至消失，核膜破坏明显，有的细胞结构不清，趋于死亡。
结论：bFGF对HLECs的促增殖作用可被FGF受体抗体所阻断。
【关键词】 人晶状体上皮细胞 碱性成纤维细胞生长因子 受体 抗体 电镜
0引言
后囊混浊的发生与术后晶状体上皮细胞增殖、迁移及纤维化有关，在晶状体后囊变化与生长因子的作用密切相关，尤其是碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)受体的作用更不容忽视。阻断FGF受体可抑制bFGF对HLECs增殖作用[1]，我们对其作用使细胞超微结构发生变化进行研究。
1材料和方法
1.1胎儿晶状体上皮细胞培养 同一个胎儿新鲜的2个眼球，生理盐水充分冲洗干净，再用庆大霉素冲洗，置干净的玻璃器中，清除眼球周围组织，剪去结膜。用已稀释的庆大霉素溶液充分冲洗已处理的眼球，置另一干净的玻璃培养器中，在超净工作台上距角膜缘约4cm处环形剪开巩膜，移去上部（角膜用作培养角膜上皮细胞）后取出晶状体。沿晶状体赤道部分离出前囊膜，放入27mm直径的塑料培养皿，细胞面朝皿底，加几滴合150g/L DMEM培养液（pH 7．2），用虹膜剪子将囊膜尽量剪成碎块，展平并分散开后放入CO2箱（日本SANTO公司MCO17AI）中约4h，然后，轻轻地补加培养液约2.5mL，继续培养（培养条件为37℃，50mL/L CO2，饱和温度。每日显微镜下观察细胞生长情况，7～10d更换培养液。
图1 A：胞内较多的线粒体，粗面内质网，游离核糖体及少量微丝结构；核膜完整，染色质均匀（×17000）；B：胞内较多的线粒体、丰富游离核糖体及少量微丝结构（×22000）（略）
传代培养：当细胞生长融合时，吸出培养液，用Hanks液冲洗2次，加2.5g/L胰蛋白酶溶液1.5mL，消化4～8min吸出，加入含150g/L FCF DMEM培养液反复吹打，使细胞悬浮，公布均匀，然后分至几个培养皿继续培养。
1.2细胞标本的制备 使用2代细胞进行实验。将切成小块的盖玻片消毒后放在27mm直径的玻璃培养器内，将胎儿晶状体上皮细胞、加入bFGF（100μg/L）细胞及加入bFGF（100μg/L）和bFGF受体抗体（5mg/L）的细胞悬液分别滴在培养器内的盖玻片小块上，制成3个不同样本，放入CO2培养箱内4d。
1.3透射电镜标本制作 待盖玻片长满细胞，弃去培养液，用Hanks液冲洗2次。用橡皮刮刀将贴壁生长的细胞刮下，离心后去除上清，30g/L戌二醛固定后，加入10g/L锇酸固定，乙醇逐级脱水，Epon812渗透包埋，60℃温箱内聚合72h，LKBB400型超薄切片机切片，醋酸铀和枸酸铅双染，于philips EM 400T透射电镜下观察并照像。
2结果
2.1胎儿晶状体上皮细胞 胎儿晶状体上皮细胞（2代）表现胞内正常的线粒体、粗面内质网、游离核糖体及少许微丝结构；核膜完整，染色质均匀，细胞器数目有限，提示了HLECs功能尚可，但其有增殖能力差的特点（图A，B）。
2.2加入bFGF（100μg/L）的胎儿晶状体上皮细胞 在胎儿晶状体上皮细胞培养中加入bFGF，其细胞超微结构为：细胞膜完整，局部突起较多，呈短棒或指状；胞内较丰富的细胞器，尤其可见功能良好的线粒体明显增多，基质亦较致密，并见游离核糖体增多，近核附近有较多沿细胞长轴平行排列的微丝结构；核膜完整，染色质粗大、均匀，核仁增大。细胞器增多，说明了加入bFGF后，其对细胞发挥了促增殖作用，使细胞的代谢功能旺盛，有丝分裂能力增强；同时说明了bFGF对此细胞亦有一定的分化效应，如超微结构见到沿长轴排列的微丝结构，是细胞分化后典型的特征（图2，3）。
2.3加入bFGF（100μg/L）和FGF受体抗体（5mg/L）胎儿晶状体上皮细胞 同时加入bFGF和FGF受体抗体时，细胞超微结构表现为细胞突起消失，膜明显破坏，大量线粒体空化，嵴消失，基质减少，呈云雾状退化，内质网亦明显减少甚至消失，仅有少量微丝并呈断裂状，细胞器明显减少、破坏，有的消失；核膜破坏明显；有的细胞结构不清甚至趋于死亡，提示了抗体中和实验bFGF受体被其抗体所拮抗，使bFGF的作用消失，细胞代谢基本消失，并趋向死亡状态（图4，5）。
图2 胎儿晶状体上皮细胞（2代）+bFGF近细胞核附近有较多沿细胞长轴平行排列的微丝结构；核膜完整，染色质均匀，核仁增大（×36000）（略）
图3 胎儿晶状体上皮细胞（2代） +bFGF细胞包膜完整，局部突起较多，呈短棒或指状；胞内细胞器丰富，较多的线粒体，基质较致密，游离核糖体增多（×4600）（略）
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