作者：罗丽娟，周辉 作者单位：(330006) 中国江西省南昌市，南昌大学研究生院医学部2005级；(330006) 中国江西省南昌市，南昌大学第二附属医院眼科
【摘要】目的：探讨MMP2及其抑制剂TIMP2和影响它们作用的TGFβ1在翼状胬肉中的表达及意义。
方法：采用Maxvision免疫组化技术检测在20例翼状胬肉和10例正常球结膜中MMP2、TIMP2及TGFβ1的表达，并比较两组中表达的差异。
结果：MMP2和TGFβ1在翼状胬肉中的表达的阳性率显著高于正常球结膜中它们的阳性表达率（z= 4.618， 4.376，P<0.01），而TIMP2在两组中的表达差异无显著性（z=1.319，P>0.05）。经Spearman等级相关检验分析，在翼状胬肉中，MMP2 和TGFβ1的阳性表达率存在正相关（r=0.686，P<0.01）；而MMP2和TGFβ1与TIMP2阳性表达率之间无相关（r= 0.410， 0.143，P>0.05）。
结论：TGFβ1介导的MMP2和TIMP2表达失衡在翼状胬肉的发生、发展及侵犯角膜过程中发挥着重要的作用。
【关键词】 翼状胬肉；基质金属蛋白酶2；金属蛋白酶2组织抑制因子；转化生长因子β1
Expression and significance of MMP2，TIMP2 and TGFβ1 in pterygium
LiJuan Luo, Hui Zhou
Department of Medicine, Grade 2005 of Graduate College, Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China; Department of Ophthalmology, the Second Affiliated Hospital, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China
Abstract
AIM: To investigate the expression and significance of matrix metalloproteinase2 (MMP2), tissue inhibitor of metalloproteinase2 (TIMP2) and transforming growth factor beta (TGFβ1) in the pterygium.
METHODS: Maxvision immunohistochemical staining was used to detect the expression of MMP2，TIMP2 and TGFβ1 in 20 cases with pterygium and 10 cases with normal conjunctiva.
RESULTS: There was significant difference of expression of MMP2 and TGFβ1 between the pterygium and the normal conjunctiva (z= 4.618, 4.376; P<0.01). But there was no statistic significance for TIMP2 expression (z=1.319; P>0.05). By the Spearman rank correlation test analysis, there was correlation between the expression of MMP2 and TGFβ1 (r=0.686;P<0.01), and there was no correlation between the expression of MMP2 and TIMP2 or between the expression of TGFβ1 and TIMP2 (r= 0.410, 0.143;P>0.05).
CONCLUSION: The imbalance induced by TGFβ1 between the expression of MMP2 and TIMP2 may play a critical role during the occurrence, development and invasion of pterygium.
KEYWORDS: pterygium; matrix metalloproteinase2; tissue inhibitor of metalloproteinase2; transforming growth factor beta1
0引言
翼状胬肉是睑裂部球结膜纤维血管组织呈三角形膜样增生而侵犯角膜的一种眼表疾病，该疾病于热带及低纬度地区发病率较高，其病因和发病机制还不清楚，普遍认为与紫外线照射、气候干燥、接触粉尘等有关[1]。基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase2，MMP2）是降解细胞外基质（ECM）的含锌蛋白质。金属蛋白酶2组织抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinase2，TIMP2）是机体自发产生的特异性抑制MMP2功能的蛋白质。在生理条件下，MMP2和TIMP2之间保持动态平衡，在维持ECM沉积和分解平衡中起重要作用[2]。但在某些病理条件下，MMP2与TIMP2的动态平衡被打破，将导致组织的破坏并致病。近年来研究表明，MMP2和TIMP2在翼状胬肉的发生发展过程中可能发挥一定的作用。我们对翼状胬肉组织中MMP2、TIMP2和影响两者的转化生长因子β1（transforming growth foctor beta1，TGFβ1）的表达进行研究，探讨它们在翼状胬肉发生发展过程中发挥的作用和相互关系。
1材料和方法
1.1材料 收集我院200706/200711门诊确诊为发生于鼻侧的原发性进行期翼状胬肉，且患者同意并行手术切除的翼状胬肉组织20例，男11例11眼，女9例9眼；年龄27～75（平均54.8）岁，病程1～10a。术中完整切除翼状胬肉头部和颈体部。标本置于40g/L中性甲醛中固定48h，后行常规石蜡包埋。另正常球结膜10例，取自因外伤在我院同意并行眼内容物剜出术患者的球结膜组织10例。男7例7眼，女3例3眼；年龄26～68（平均37.2）岁。
图1A：翼状胬肉上皮中MMP2的表达（Maxvision×400）;B：正常球结膜（Maxvision×400）（略）
图2A：翼状胬肉上皮中TIMP2的表达（Maxvision×400）;B：正常球结膜（Maxvision×400）（略）
图3A：翼状胬肉上皮中TGFβ1的表达（Maxvision×400）;B：正常球结膜（Maxvision×400）（略）
标本置于40g/L中性甲醛中固定48h，后行常规石蜡包埋。所有病例术前均排除其他角膜及结膜疾病。
1.2方法 取组织蜡块制成3～5μm的切片。兔抗人MMP2，TIMP2和TGFβ1多克隆抗体，及Maxvision免疫组化试剂盒均购自福州迈新公司。免疫组化步骤按Maxvision法操作，以PBS代替一抗作为阴性对照，阳性对照由福州迈新公司赠送的标准阳性对照片。细胞内有呈棕黄色颗粒的为阳性细胞。参考Frank等[3]提出的半定量高倍镜下计数1000个细胞，将细胞百分率和染色强度分别计分：阳性细胞百分率0～4%为0分；5%～25%为1分；26%～50%为2分；51%～75%为3分；76%～100%为4分。阳性细胞染色强度，无染色为0分；淡棕黄色为1分；棕黄色为2分；深棕黄色为3分。将两者分数相加为组织总分,0分为阴性（）；1～2分为弱阳性（+）；3～5分为阳性（++）；6～7分为强阳性（+++）。
统计学处理：两组间率的比较采用秩和检验，两两指标间阳性表达率相关性采用Spearman等级相关检验。以P<0.05为差异有显著性。
2结果
2.1 MMP2的表达 翼状胬肉中可见棕黄色颗粒分布于上皮层及上皮下纤维层细胞胞浆中，以上皮层最显著（图1A）；表明MMP2在翼状胬肉中的明显表达。而在正常球结膜中未见棕黄色颗粒（图1B），提示MMP2无明显表达。经统计学分析，MMP2在翼状胬肉中阳性表达明显高于其在正常球结膜中的阳性表达，差异有显著性意义（z=4.618，P<0.01）。TIMP2的表达在翼状胬肉中可见棕黄色颗粒弥散分布于上皮层细胞胞浆中（图2A）；在正常球结膜中也可见棕黄色颗粒分布上皮层细胞胞浆中（图2B），表明TIMP2在翼状胬肉及正常球结膜中均呈阳性表达。经统计学分析，TIMP2在翼状胬肉中阳性表达与其在正常球结膜中的阳性表达差异无显著性意义（z=1.319，P>0.05）。
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