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2 结果
2.1 在制作蒸发过强型兔干眼模型前后检测Schirmer Ⅰ、BUT、虎红染色的变化。到第6周时，成功制成干眼模型（见表1）。
2.2 术后第1、第6、第11周，两组兔泪液中IL-6、TNF-α含量对比，实验组的含量比对照组明显增高，经统计学处理显示，两组差异有非常显著的统计学意义(P<0.01)（见表2）。
2.3 ICAM-1在两组兔角膜、结膜组织上皮均有表达，阳性反应物呈棕黄色，主要表达于细胞浆。实验组ICAM-1的表达较对照组明显增加。经统计学处理显示，两组差异有非常显著的统计学意义(P<0.01)（见表3、图1~图4）。
3 讨论
美国国立眼科研究所将干眼分为泪液生成不足型和蒸发过强型两种。泪液生成不足型干眼在临床上以干燥性角结膜炎(keratoconjuctivitis sicca，KCS)和Sj?觟gren综合征(Sj?觟gren Syndrome，SS)最为多见，蒸发过强型干眼则包括睑板腺功能障碍(meibomain gland dysfunction，MGD)、暴露及角膜接触镜等因素所致的干眼症。
MGD与睑板腺阻塞或分泌异常有关，是导致脂质性泪液缺乏或蒸发过强型干眼的主要原因之一[6]。关于细胞因子在引起干眼的发病机制中所起的作用，国外已有很多研究，但都是关于泪液生成不足型干眼的，而对于蒸发过强型干眼的发病机制却鲜见报道。
TNF-α是细胞黏附和趋化的主要递质，主要负责炎症期间细胞迁移的调控。1999年，Pflugfelder将SS患者结膜上皮TNF-α的表达与正常人对比发现，TNF-α的RNA转录产物在SS患者结膜上皮中明显增高[2]。2004年，Oshida等[7]采集33名SS患者泪液，用双夹心抗体酶联免疫吸附测定法检测干眼患者泪液中TNF-α的含量，并通过荧光素染色评分判断角膜上皮受损情况。结果显示干眼患者泪液中TNF-α浓度在8~1500 pg/ml之间，荧光素染色评分高的患者浓度高，这表明泪液中TNF-α含量与角膜上皮受损呈正相关。
IL-6是一种调节炎症反应的细胞因子，是T细胞和B细胞功能的重要调节因子，可刺激造血细胞的生长和分化。免疫病理结果显示，KCS和SS患者结膜上皮多种炎性因子增高，而IL-6是最有价值的[1]，在SS患者的唾液和血清中IL-6含量也增高[8]。
ICAM-1是最早发现的免疫球蛋白超家族黏附分子之一，IL-6、TNF-α、IFN-γ等细胞因子均可促进ICAM-1分子的表达。在SS患者的泪腺中发现 ICAM-1存在于腺泡上皮细胞、成纤维细胞和少量单核细胞上[9]。Gao等[3]采用免疫组化和原位杂交法检测ICAM-1在KCS患者和SS小鼠泪腺和结膜组织中的表达，发现其含量增加，ICAM-1在上皮细胞中合成是眼表易患炎症的标志。
睑板腺分泌睑脂构成泪膜的脂质层。1941年，VonBahr首次对兔角膜表层的泪液蒸发进行测量，发现去除脂质层后泪液蒸发率增加10～20倍，角膜明显变薄。由于脂质层异常造成的干眼症，共47%～78%的泪液可通过蒸发失去。临床上如患者睑板腺缺如而泪液生成正常，可使泪液蒸发率增加3倍，从而导致蒸发过强型干眼的发生。由于临床上干眼患者病因较复杂，包括很多类型， 如视频终端综合征和大楼办公室综合征等，很难观察到单纯由于睑板腺功能障碍导致的蒸发过强型干眼患者，因此本实验通过制作蒸发过强型干眼动物模型来检测细胞因子的含量，并推测其在发病机制中所起的作用。
为制成蒸发过强型干眼的动物模型，1989年，Glibard等[10]用纤细的电刀插入兔睑板腺开口逐个进行灼烙(每个开口灼烙时间约1 s)，导致睑板腺开口阻塞，睑板腺脂质不能正常排出，引起泪膜脂质层异常，从而产生干眼。肖启国等[4]对Gilbard的方法进行改进，采用手术用烧灼器直接烧灼睑板腺开口，使操作更简便、快速。在术后第6周左右就可出现明显的虎红染色及角膜荧光素染色等干眼体征。
本实验采取肖启国等制作蒸发过强型干眼模型的方法，在第6周时，根据测得BUT、Schimer Ⅰ试验以及角膜虎红染色结果确定达到干眼诊断标准。通过放射免疫和酶联免疫的方法检测正常兔和模型兔泪液中IL-6、TNF-α含量对比，可以看出，蒸发过强型干眼模型形成后，实验组与对照组相比较，两种细胞因子的含量显著增高，经统计学分析，差异有显著性统计学意义。
由本实验还观察到，ICAM-1在两组兔角膜、结膜上皮均有表达，阳性反应物呈棕黄色，主要表达于细胞浆。每1000个细胞阳性表达数实验组与对照组比较，ICAM-1的表达明显增加。ICAM-1分子分布广泛，如白血球、内皮细胞、某些肿瘤细胞、上皮细胞、肝细胞、平滑肌细胞等，IL-6、TNF-α等细胞因子均可促进ICAM-1分子的表达。正常角膜中，ICAM-1不表达或很低水平地表达于角膜缘血管内皮细胞[11]，炎症或免疫反应可上调ICAM-1的表达[12]。IL-6和TNF-α同属细胞因子网络中的核心成员，TNF-α为IL-6的强诱导剂，而IL-6和TNF-α的表达增加又上调ICAM-1的表达，三者互相促进又相辅相成，是眼表免疫反应发生的标志。
由本实验的结果看出，在蒸发过强型干眼中三种细胞因子的含量均有增高，由此推测由睑板腺功能障碍引起的蒸发过强型干眼不单纯由睑板腺的阻塞或分泌异常引起，也与细胞因子的增加及免疫反应有关。但是由于本实验的局限性，对三种因子在干眼病损过程中是如何发挥作用未进行深入的研究，因此，进一步研究三种因子在发病过程中如何发挥作用以及如何对细胞因子的分泌进行有效的调控，此对蒸发过强型干眼的预防、治疗及防止复发具有重要的意义。
【参考文献】
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