摘要 目的 研究白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)在翼状胬肉发病机理中的作用。方法 采用细胞生物活性法和放射免疫检测技术检测了30例患者翼状胬肉组织的体外培养上清中和正常组织中IL-6和TNF-α的含量。结果 翼状胬肉组织培养上清中的IL-6和TNF-α含量分别为19.8±12.1kU·g-1蛋白和43.8±22.1μg·g-1，均明显高于正常球结膜组(4.7±1.6kU·g-1蛋白和9.4±3.6μg·g-1蛋白，P＜0.01)；进行期组的IL-6和TNF-α含量分别为21.4±11.9kU·g-1蛋白和56.6±23.8μg·g-1蛋白，均明显高于静止期组(16.9±12.3kU·g-1蛋白和29.2±14.3μg·g-1蛋白，P＜0.05)，且抗TNF-α抗体对IL-6的产生具有负向的调节作用。结论 翼状胬肉的发生、发展可能与IL-6和TNF-α的异常分泌有关。
Significance of the abnormal secretion of IL-6 and TNF-α in the pterygium
ZHANG Jun-Hua,ZHANG Guo-An,JIN Wei-Er,LIN Ying
From the Department of Ophthalmology,Fujian Provincial People's Hospital(ZHANG Jun-Hua,JIN Wei-Er,LIN Ying);Clinical Research Unit of Immunology,Chinese PLA 476 Hospital(ZHANG Guo-An)
Abstract Objective To study the roles of interleukin 6(IL-6)and tumor necrosis factor(TNF-α)in the pathogenesis of pterygium.Methods Bioactivity assay and radioimmunoassay were used to measure the levels of IL-6 and TNF-α in tissue cultural supernatant of pterygium specimens in 30 patients.Results The levels of IL-6 and TNF-α in tissue cultural supernatant of pterygium were significantly higher than that of normal conjunctival specimens (P＜0.01),and there was a significant difference between cases and the quiescent cases (P＜0.05).Conclusion The abnormal secretion of IL-6 and TNF-α may be a positive factor in the pathogenesis of pterygium.
Key words pterygium;tumor necrosis factor；interleukin 6 翼状胬肉是眼科常见病、多发病，但其确切发病机理尚不清楚。病理学研究表明，翼状胬肉形成的主要原因是大量增生的成纤维细胞和血管的增生与退变［1］。近年来的研究表明，细胞因子在炎症反应、成纤维细胞增生及血管形成方面起着重要的调控作用［2］。我们对翼状胬肉组织在体外分泌产生白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的情况进行了研究，以探讨IL-6和TNF-α在翼状胬肉发病机理中的作用。
1 材料与方法
1.1 研究对象 所选病例全部为我院眼科门诊的翼状胬肉患者，共30例30只眼，全部为初发型，根据病变局部有无充血、肥厚和浸润，又分为进行期(19例)和静止期(11例)，无其它角膜、结膜疾患。所有患者确诊后均行翼状胬肉单纯切除术，同时剪除患眼角膜上缘上方约3mm处的正常球结膜组织约2mm×5mm作为自身对照。
1.2 研究方法
1.2.1 翼状胬肉组织培养上清的制备 翼状胬肉及正常球结膜组织取材后迅速放入含100mL·L-1胎牛血清(FCS)的RPMI 1640(Gibco)培养液(1.0mL)中，置37℃孵育24h，研磨匀浆后2500r·min-1离心20min，收集上清，置-30℃冰箱中保存待测TNF-α和IL-6含量，组织蛋白含量采用改良Lowry法测定。
1.2.2 TNF-α含量的测定 采用RIA法，试剂盒为上海长征医学科学有限公司生产。
1.2.3 IL-6活性测定 采用IL-6依赖性细胞株B9.9增殖反应MTT比色法［3］，B9.9细胞株由荷兰Aarden博士惠赠；IL-6标准品由日本大阪大学工学部提供。
1.2.4 数据处理 每份标本平行测定3孔，求平均值，各组间均数比较采用t检验。
2 结果
2.1 翼状胬肉与正常球结膜组织IL-6和TNF-α体外分泌水平的比较 翼状胬肉和正常球结膜组织在体外培养后其上清液中均能测到IL-6和TNF-α活性，但翼状胬肉组均明显高于正常球结膜组(P＜0.01)，见表1。
表1 翼状胬肉和正常球结膜组织细胞因子的分泌水平
Table 1 Secreting levels of cytokines in pterygium
and normal conjuctiva specimens ( ±s)
| Group |
n |
IL-6(kU·g-1) |
TNF-α(μg·g-1) |
| Pterygium |
30 |
19.8±12.1* |
43.8±22.1* |
| Normal conjuctiva |
30 |
4.7±1.6 |
9.4±3.6 |
*Compared with normal conjuctiva group P＜0.012.2 不同期翼状胬肉组织IL-6和TNF-α分泌水平的比较 进行期翼状胬肉的IL-6和TNF-α体外分泌量要明显高于静止期翼状胬肉组织(P＜0.05)，见表2。
表2 进行期和静止期翼状胬肉的细胞因子分泌水平
Table 2 Secretive levels of cytokines in progressive
cases and quiescent cases (±s)
| Group |
n |
IL-6(kU·g-1) |
TNF-α(μg·g-1) |
| Progessive cases |
19 |
21.4±11.9* |
56.6±23.8* |
| Quiescent cases |
11 |
16.9±12.3 |
29.2±14.3 |
*Compared with quiescent cases P＜0.052.3 特异性中和抗体对翼状胬肉IL-6和TNF-α产生的影响 向进行期翼状胬肉组织培养体系中加入2g·L-1的抗TNF-α抗体(Sigma)，孵育24h后，检测IL-6活性，发现IL-6的产生水平明显降低，为15.4±8.6kU·g-1蛋白，与未加抗体组相比较，差异显著(P＜0.05 )；而加入抗IL-6抗体(Sigma)对TNF-α的产生却没有明显的影响。
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