黄晓莉   周炼红   艾明   邢怡桥   王炯

武汉大学人民医院眼科   430061

目的：研究重组腺相关病毒介导的转化生长因子-β1（recombinant adeno-associat-ed virus mediated transforming growth factor-β1，rAAV-TGF-β1）对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用以及对CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells)数量及功能的影响，探讨其作用机制，为临床上人工诱导移植免疫耐受提供一种新的途径。

方法：构建rAAV-TGF-β1真核表达质粒载体。80只角膜新生血管化的SD大鼠行穿透性角膜移植术。实验组(40只)：角膜植片预浸泡在rAAV-TGF-β1(1013vg/L)的达尔伯克氏必需基本培养液F12混合培养液中37℃孵育30min；对照组(40只)：角膜植片预浸泡在0.1mol/L磷酸盐缓冲液中37℃孵育30min。裂隙灯观察TGF-β1对大鼠角膜植片存活时间、排斥反应指数的影响。术后第1w、2w、4w、8w、12w 对角膜植片行组织病理学检查，流式细胞术分析术后大鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量和功能的变化。

结果：对照组角膜植片平均存活时间为(9.40±2.45)d，实验组为(52.70±1.51)d，比对照组显著延长(P<0.01)；术后第7天实验组角膜植片排斥反应指数（3.48±0.86）明显低于对照组（7.65±0.42），差异具有显著统计学意义(P<0.01)。实验组角膜植片炎性细胞浸润、胶原纤维及新生血管增生程度较同时期对照组明显减轻，组织病理学改变具有明显差异。术后不同时期实验组与对照组相比，大鼠脾淋巴细胞中CD4+CD 25+调节性T细胞数量显著增高，具有显著性差异（P<0.01），对调节性T细胞免疫抑制功能具有促进作用的特异性表型分子CTLA-4表达比例明显上升，具有显著统计学差异（P<0.05）；两者均以排斥反应最剧烈的时期术后1w时提高最为显著。

结论：重组腺相关病毒是眼科基因治疗的有效载体。rAAV-TGF-β1能显著延长角膜植片存活时间，抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应。TGF-β1可上调CD4+CD25+调节性T细胞数量并增强其免疫抑制功能，这可能是TGF-β1抑制高危角膜移植排斥反应机制之一。