作者：黄祥平 作者单位：辽宁医学院附属第一医院眼科，辽宁 锦州 121001
【摘要】 目的 探讨克拉霉素对角膜新生血管形成及角膜内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor ，VEGF) 表达的影响。方法 制备大鼠角膜碱烧伤新生血管模型，将42只SD大鼠随机分成正常组6只(6眼) 、胃饲克拉霉素60mg·kg-1的实验组18只(18眼) 、胃饲等量生理盐水的对照组18只(18眼)。运用裂隙灯、HE染色分别观察新生血管长度及面积、微血管的数量。结果 实验组新生血管生长速度变慢，血管面积减小，具有统计学差异(P<0.001) 。结论 一定剂量的克拉霉素可抑制角膜新生血管的发生。
【关键词】 克拉霉素 角膜新生血管 血管内皮生长因子 碱烧伤
Experimental Studies of Clarithromycins Inhibiting Corneal Neovascularization HUANG Xiang-ping，PANG Dong-bo
（Department of Ophthalmology,the First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University ,Jinzhou 121001 China）【Abstract】 Objective To study the inhibitive effects of clarithromycin on angiogenesis and expressions of vascular endothelial growth factor (VEGF). Methods Alkali burns of corneal model was established as usual on 42 SD rats. The experimental rats were randomly divided into control group and study group, and another 6 SD rats worked in normal group. The occurrence and development of corneal neovascularization (CRNV) were observed by thslit-lamp microscopy. Results In the experiment group, CRNV grew more slowly. The area of blood vessel became smaller, which had a statistical difference. Conclusions Acertain dosage of clarithromycin can inhibit the occurrence of CRNV.
【Key words】 clarithromycin；corneal neovascularization； vascular endothelial growth factor； alkcaline burn
角膜没有血管,其营养成分由角膜缘血管网扩散入角膜。在病理状态下,从角膜缘血管网形成的新生毛细血管逐渐侵入角膜而形成角膜新生血管(corneal neovascularization, CRNV) ,是一种常见的眼部病变。它可引起角膜正常微环境的破坏,使眼前节段相关的免疫赦免偏离消失，是角膜移植术后发生排斥反应的高危因素［1］ 。克拉霉素（clarithromycin,CAM）是临床上广为应用的新型14 环大环内酯类抗生素,由于CAM 参与调控许多与血管生成密切相关的细胞因子,因此CAM 可能是一种潜在的血管生成抑制剂。本实验建立大鼠角膜碱烧伤模型，同时加入CAM干预，通过免疫组化等方法观察伤后不同时期VEGF表达情况及新生血管的演变过程，以揭示VEGF与角膜新生血管之间的时空关系，并对CAM抑制CRNV发生的机制做初步探讨。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 健康SD大鼠42只，体重200～300g，雌雄不拘，由辽宁医学院实验动物中心提供。术前经裂隙灯检查均无明显眼前段病变，任选6只作为正常组，其余36只建立角膜碱烧伤模型后随机分成对照组和实验组，每组18只18眼。
1.1.2 模型制备 36只(36 眼) SD大鼠，10%水合氯醛(2mL·kg-1) 腹腔注射麻醉，滤纸条吸干结膜囊液体后，将统一规格直径3mm的滤纸片，浸泡在1mol·L-1 NaOH 溶液中，达饱和状态，置于干燥滤纸上1秒蘸去多余的碱液，放于右角膜中央40s，立即用60mL生理盐水冲洗角膜及结膜囊，常规喂养。
1.1.3 给药方法 采用克拉霉素片（每片125mg，购自黑龙江肇东华富药业有限责任公司）用生理盐水配制成浓度为4g·L-1的新鲜溶液。实验组 克拉霉素溶液15mL·kg-1（60mg·kg-1）胃饲，每日1次；对照组生理盐水15mL·kg-1胃饲，每日1次；正常组常规喂养。
1.2 观察方法
1.2.1 角膜新生血管的观察 于造模后1d开始每日用裂隙灯观察角膜新生血管的发生情况，至各组均出现角膜新生血管后改为隔日观察。
1.2.2 角膜新生血管面积的测量：于造模后4、7、14d随机选取实验组、对照组各6只动物测量新生血管的面积，按Robert电脑数学模型公式A=C/12×3.1416［r2-(r-l)2］计算。A为角膜新生血管生长面积，C为角膜新生血管累及角膜的圆周点数，l为角膜新生血管从角膜缘深入角膜的长度，r为角膜半径。
1.2.3 病理形态学 测量新生血管后的动物和正常组的动物处死，取下角膜，生理盐水冲洗干净，置于4%多聚甲醛中保存固定24h，行HE染色，观察角膜形态学变化。同时取14d的HE染色切片计数微血管数量，每张切片选择4个视野(×400倍) ，计数微血管数量(支/视野) ，取其平均值。
1.3 数据处理
角膜新生血管长度、面积均用均数±标准差(±s)表示，用SPSS12.0数据包行独立样本t检验分析。病理形态学及免疫组化资料采用对比描述分析。
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