作者：刘瑞芳 作者单位：新乡医学院眼科教研组，河南 新乡 453003
【摘要】 目的 探讨硫酸镁对实验性兔视网膜缺血再灌注损伤后的保护作用及其机制。方法 用眼内灌注法制成视网膜缺血再灌注模型。32只健康成年新西兰大白兔随机分为对照组、模型组、硫酸镁治疗A组和硫酸镁治疗B组。硫酸镁治疗A组于缺血后立即按140 mg·kg-1耳缘静脉推注2 mol·L-1硫酸镁，随后腹腔内补充注射1 g；硫酸镁治疗B组于缺血后,按 600 mg·kg-1腹腔内注射2 mol·L-1硫酸镁。各组分别于再灌注6 h后空气栓塞法处死兔，经光镜、电镜观察视网膜的改变。结果 再灌注6 h后，光镜下模型组视网膜神经节细胞层、内核层变薄，电镜下出现核固缩，线粒体空泡化。经硫酸镁治疗后视网膜神经节细胞层、内核层的形态学明显改善，且硫酸镁治疗A组视网膜神经节细胞层和内核层损害较硫酸镁治疗B组明显减轻。结论 硫酸镁可能在治疗视网膜缺血性疾病中有一定应用价值。
【关键词】 硫酸镁 视网膜 缺血再灌注 兔
Protective effects of magnesium sulfate on retina of rabbit with ischemiareperfusion injure
LIU Ruifang,WAN Xinshun,HAN Liying
Department of Opthalmology,Xinxiang Medical College,Xinxiang 453003,China
Abstract: Objective To investigate the protective effect of magnesium sulfate(MgSO4) on retina of rabbit with ischemiareperfusion injury.Methods The model of experimental retinal ischemiareperfusion injury was created by intraocular perfusion.Thirtytwo rabbits were randomly divided into model group,control group and MgSO4 treatment group A and MgSO4 treatment group B.MgSO4 treatment group A was given 2 mol·L-1 MgSO4 (140 mg·kg-1) through intravenous injection postischemia,then 1 g MgSO4 was given to them by intraperitoneal injection.MgSO4 treatment group B was given 2 mol·L-1 MgSO4(600 mg·kg-1) through intraperitoneal injection postischemia.Reperfusion for 6 hours,then killed the rabbits with air embolism and observed the changes of retina by light microscope and electron microscope.Results Stratum ganglionare nervi optici and inner nuclear layer became thinner under light microscope,and there was pyknosis and mitochondria vacuolization under electron microscope after reperfusion for 6 hours.The morphology of stratum ganglionare nervi optici and inner nuclear layer improved obviously after treatment with MgSO4,and the injure of MgSO4 treatment group A was lower than MgSO4 treatment group B.Conclusion Magnesium sulfate may have some applied value for treating the disease of retina ischemia.
Key words: magnesium sulfate;retina;ischemiareperfusion；rabbits
视网膜缺血性疾病是临床中比较常见的致盲性眼病，目前无理想的药物治疗方法。研究证实，钙超载是缺血引起细胞死亡的一个必要条件［12］，镁离子是钙离子的天然拮抗剂，硫酸镁目前已广泛应用于脑缺血神经保护的治疗。作者采用兔高眼压视网膜急性缺血模型，通过观察硫酸镁对视网膜的形态学影响，探讨硫酸镁对家兔视网膜缺血再灌注损伤（retinal ischemic reperfusion injury,RIRI）保护作用的可能机制。
1 材料与方法
1．1 实验动物
健康成年新西兰大白兔32只(郑州大学医学院实验动物中心提供)许可证号SCXK20020027,体质量1.5～2.5 kg，雌雄不限。
1．2 模型制作
32只大白兔随机分为对照组、模型组、硫酸镁治疗A组,硫酸镁治疗B组,各组8只，实验前裂隙灯及眼底镜检查眼部无异常,眼压计测量排除高眼压兔。对照组自由生长，不予任何处理。模型组、硫酸镁治疗A组、硫酸镁治疗B组大兔采用眼内灌注法，用30 g·L-1戊巴比妥钠30 mg·kg-1的剂量耳缘静脉注射麻醉，10 g·L-1丁卡因点眼局部麻醉，复方托吡卡胺眼液点左眼散大瞳孔。将麻醉后的大兔固定在手术台上，开睑器开睑,将连接无菌生理盐水的头皮针从颞侧角膜缘刺入左眼前房固定，并维持在前房中央，斜面向视盘方向，升高输液瓶高度至左眼垂直距离164 cm处，此高度在眼内形成120 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）的眼内压。外观可见球结膜苍白，瞳孔红光反射消失，眼底镜（+8～+10 D）可见：眼底视网膜血管断流，视网膜苍白水肿。维持45 min后，降低输液瓶高度达右眼水平，拔出针头，轻压角膜缘，放出房水，眼球变软，可见球结膜充血，瞳孔出现红光反射，视网膜血液恢复，即为视网膜缺血再灌注损伤模型建立成功。模型建立后，硫酸镁治疗A组按140 mg·kg-1耳缘静脉推注2 mol·L-1硫酸镁（扬州中宝制药公司，批号 0201152），随后一次性腹腔内补充注射硫酸镁1 g。硫酸镁治疗B组按600 mg·kg-1腹腔内注射2 mol·L-1硫酸镁。模型组不予任何药物。实验中，维持动物体温36.5 ℃～37.0 ℃，并间断用抗生素眼液（妥布霉素眼液）点眼，维持角膜湿润和防止感染。
1.3 电子显微镜标本的制备及观察
各组动物分别于再灌注6 h后摘取眼球，将所摘眼球在冰上沿矢状轴稍偏侧(外侧)切开眼球,去除晶状体、玻璃体,取颞侧(右眼9点,左眼3点)距视神经2 mm处1块2 mm×2 mm全层球壁块,立即置于体积分数2.5％戊二醛溶液中固定24 h后,磷酸缓冲液冲洗,体积分数1％锇酸固定,脱水包埋,切片,醋酸铀液染色,柠檬酸铅液染色,透射电子显微镜(日立产 H7650型)观察视网膜超微结构并拍照。
1.4 光学显微镜标本的制备及观察
将所摘取各眼球于颞上象限取1块8 mm×8 mm全层球壁块,置入体积分数10％甲醛中,后酒精梯度脱水,透明,石蜡包埋,染色,后在光镜下观察其视网膜组织结构的改变并拍照。
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