作者：王秀芳　天津医科大学总医院

　　急性眼表损伤在急症处理后，对于并发症的治疗是现代眼科领域内棘手问题之一。羊膜移植联合自体角膜缘干细胞移植是治疗眼表疾病的有效手段[1.2]。体外培养自体角膜缘干细胞移植是近年来开展的一种新的治疗方法，其取材方便, 自体体外培养的角膜缘干细胞数量充足, 可完全覆盖创面,避免因取材过大造成的角膜缘干细胞大量丢失而致代偿衰竭, 该术式无移植排斥反应,成功率高[3.4]。我院于2007年1月完成1例羊膜移植联合体外培养自体角膜缘干细胞移植的手术，现将手术配合介绍如下。

　　1 临床资料 患者男，16岁，2006年2月因颜面部鞭炮爆炸伤急诊行左眼睑皮肤复杂裂伤修复术，左眼板层角膜裂伤缝合术，双眼角结膜异物取出术。2006年5月左眼眼睑、眼球活动受限再次入院。行左眼睑球粘连分离术，结膜移植术，角膜缘干细胞移植术。2007年1月因左眼上睑与眼球粘连半年余第3次入院。查体可见：左眼视力0.08，左眼睑红肿，内眦部斜行皮肤瘢痕， 睑裂稍小，球结膜充血，上睑结膜与球结膜及上部角膜粘连，角膜表面假性胬肉组织长入瞳孔缘约3mm，虹膜文理尚清，瞳孔变形，上移，后粘，瞳孔缘撕裂，光反应消失。行左眼胬肉切除术，睑球粘连分离术，羊膜移植联合体外培养自体角膜缘干细胞移植术。术后3个月胬肉覆盖区角膜恢复透明，眼球运动较术前好转。

　　2 手术方法简介 2.1 羊膜取材与保存 羊膜取自健康剖宫产产妇的胎盘组织(母体产前行血清学检查，排除乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒、巨细胞病毒、衣原体及获得性免疫缺陷综合征等传染性疾病)。胎盘组织用无菌生理盐水将胎盘表面清洗干净,然后置于抗生素生理盐水(含青霉素50 mg/L、链霉素50 mg/ L 、二性霉素B2.5 mg/ L、新霉素100 mg/ L)中浸泡10 min。在无菌技术操作下钝性剥离出羊膜,剪成约2.5 cm ×2.5 cm 大小。将制备好的羊膜放入纯甘油瓶内脱水,24 h 后转入另一纯甘作者简介：王秀芳（1968-）女，主管护师，本科 油瓶中,封盖,贴好标签, - 20。C冰箱内保存。 2.2 角膜缘干细胞体外培养 于术前14天用抗生素眼药水点眼3天，4次/日。3天后在显微镜下取同侧眼颞下角膜缘，大小为1×2mm2深度达浅基质层2块组织，放于北京赛尔泰和生物医药科技有限公司提供的专用保存液中，置2。C—10。C的保温箱中，于12ｈ内送到细胞培养室，进行体外细胞培养和增殖，将增值的细胞构建于可吸收的纤维蛋白生物支架上，经过约10天左右完成干细胞体外培养和组织工程自体角膜干细胞上皮的构建。 2.3 移植方法 常规消毒铺巾，上下睑做牵引缝线，沿假性胬肉头部外约0.5mm剥除假性胬肉，分离结膜下组织，剪除，间断缝合羊膜及培养的自体角膜缘干细胞于缺损的结膜上缘，其上保存一部分至穹隆以上，间断缝和两层组织，固定于角膜缘外约1mm。结膜下注射庆大霉素和地塞米松。

　　3 护理配合 3.1 术前准备 3.1.1 术前护理 (1)心理护理：术前1天到病房看望患者。进行自我介绍，简单介绍手术治疗原理，手术效果和安全性，减轻患者及家属的心理压力，消除不良情绪和顾虑，增强治愈疾病的信心，获取良好的依从性，积极配合治疗[5]。(2) 患者准备：因患者年龄较小手术需在全麻下进行，向患者讲解全身麻醉的注意事项，如术前12h禁食、6h禁水及麻醉后下尿管，苏醒后会有憋尿感均属正常。 3.1.2 仪器及物品准备 显微镜、电视监视系统、常规眼科敷料包和器械、显微器械、制备好的羊膜、体外培养的自体角膜缘干细胞、一次性隧道刀、保险刀片、8/0可吸收线、10/0尼龙线、1:2000U庆大霉素生理盐水、吸引器、吸痰管等。 3.2 配合要点 3.2.1 术前自体角膜缘干细胞取材：患者于术前14天行角膜缘干细胞取材体外培养。常规表麻消毒铺巾后，开睑器开睑。1:2000U庆大霉素生理盐水冲洗结膜囊，球后注射针头2%盐酸利多卡因行颞下方结膜下注射并使结膜隆起，用0.12有齿镊、维纳斯剪分离结膜，用隧道刀在基质(浅)层内向透明角膜方向分离，取1×2mm2两块组织放于培养液中。患者结膜囊内涂碘必舒眼膏，包盖。 3.2.2 术日患者入室后仰卧于手术床中央，调节头位使头部后仰约150便于术中操作。协助麻醉师建立静脉通道，麻醉后行保留导尿，动作轻柔，避免损伤尿道。 3.2.3 巡回护士将制备保存的羊膜甘油瓶从冰箱取出,置于室温下10 min 复温。器械护士用眼科镊将羊膜组织取出放于药杯内并用无菌生理盐水冲洗3遍,冲掉羊膜上的甘油，再用1:2000U 庆大霉素生理盐水浸泡复水30min后可使用。 3.2.4 常规洗眼、冲眼、安尔碘消毒后铺无菌单。因上睑睑球粘连，置入开睑器有困难，器械护士备好两针带针线(5×12角针、0号线)做上、下睑牵引线开睑，暴露眼球。 3.2.5 沿假性胬肉头部外侧约0.5mm分别用保险刀片、隧道刀、钝性分离剥除假性胬肉，分离结膜下组织，去除结膜下纤维增生组织，充分松解结膜。暴露巩膜组织。 3.2.6 从培养皿中取出已经培养好的移植片修剪，平铺于暴露的创面区，用8/0可吸收线将移植片与角膜缘及结膜作间断缝合并固定于浅层巩膜上。将复水后的羊膜铺于自体角膜缘干细胞上，10/0尼龙线间断缝合于角膜缘。结膜下注射庆大霉素2万U、地塞米松2.5mg，包扎术眼。

　　4 体会 4.1 患者为全身麻醉，要注意调节室内温、湿度。随时观察尿量，尿袋满了及时更换。准备好吸引器和吸痰管随时备用。 4.2 参加病例讨论，了解手术步骤及可能发生的特殊情况，做好充分的术前准备，保证手术顺利进行。 4.3 此手术分两部进行：先行角膜缘干细胞取材进行体外培养，再行移植术。要严格执行无菌技术操作，防止感染。加取羊膜复水时甘油瓶口要用安而碘消毒且加取羊膜的镊子要弃置台下。严格掌握羊膜复水时间。 4.4 考虑再次手术，粘连较重出血多，器械护士备好盐酸肾上腺素棉签和小鱼状棉条及时递于术者擦拭止血。 4.5 器械护士根据电视监视系统做到超前配合，传递器械要稳、轻、快、准。