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3讨论
正常人或动物角膜透明无血管，角膜新生血管是与角膜化学性烧伤密切相关的常见病理现象。新生血管的形成是一个复杂的多因子作用过程，其中血管内皮生长因子（VEGF）在CNV形成过程中起着中心调控作用。VEGF是一种特异作用于血管内皮细胞的有丝分裂原，一般认为它具有两种主要作用，一是促进血管内皮细胞增殖；二是促进血管渗漏［4］。通过其两个高亲和受体flt1和flk1(KDR)发挥作用。许多实验资料证实VEGF参与了眼组织的新生血管化过程，是重要的血管生成因子［4-6］，并认为抑制VEGF是治疗眼部新生血管的希望。
我们采用NaOH造成兔角膜碱烧伤，从而诱发角膜新生血管增殖，该模型本质上属于炎症性角膜新生血管动物模型，可逼真显示角膜碱烧伤的病理状态，是研究炎症性新生血管增殖的调控机制、探索和评价其防治方法的理想模型。本实验旨在从形态学方面考察碱烧伤后角膜VEGF表达与新生血管增殖的关系。迄今已知，碱烧伤后角膜新生血管增殖可分为3个阶段［7］：非增殖期、血管增殖期、血管退行期。本实验结果也符合这一病理过程。免疫组化及角膜照片显示：碱烧伤后1～3d，角膜上皮层VEGF表达水平逐渐增高，基质层开始出现炎性细胞并表达VEGF，新生血管管腔样结构开始长入角膜基质层，此时，仅有角膜缘血管网扩张，通透性增强，致角膜水肿及混浊，肉眼下角膜缘看不到新生血管；碱烧伤后3～7d，角膜上皮层逐渐增厚，VEGF表达明显增强，基质层浸润的炎性细胞越来越多，渐次从前基质层扩展到全层，同时基质层内新生血管管腔逐渐成熟，其特征是管腔日益粗大，排列紧密，数量增多，功能成熟，并向深基质层侵入。血管内皮细胞也呈现VEGF染色阳性，角膜组织中VEGF表达于碱烧伤后5d达到高峰，在基质层及内皮层也出现了较强的VEGF表达；本期新生血管生长速度较快，肉眼下血管数量增加，分支增多，交织成网，由四周向角膜中心侵入；碱烧伤后7～14d，角膜上皮层开始变薄并有脱落，基质层浸润的炎性细胞逐渐减少，成熟的CNV管腔虽变得更加粗大，但数量减少，血管内皮细胞VEGF染色减弱，角膜组织的VEGF表达水平明显降低，肉眼下至14d时，尽管新生血管几乎长满整个角膜，但管腔变细，数量变得稀疏，部分血管闭锁、退化。
从上述病理过程可看出，伴随角膜组织VEGF表达水平的消长，血管增长速度大致呈现同样趋势，当基质层炎性细胞由浅层向深层浸润时，VEGF的表达向深层扩展并渐趋增强，角膜新生血管从角巩膜缘向中心生长的同时，也向深基质层侵入。VEGF与角膜新生血管间存在时空上的同步性。因此，有针对性地干预碱烧伤后角膜组织VEGF的表达，就可以有效抑制新生血管的生长，尤其是碱烧伤后前5d及时有效的干预更为重要。另外，我们也发现，VEGF也表达在正常角膜组织的上皮及内皮细胞中，令研究者推测，VEGF除目前已知的功能外，可能还有参与维持正常角膜组织生理功能和角膜损伤愈合的功能［4,8］。因此在治疗角膜新生血管化时，不能完全抑制VEGF。
总之，碱烧伤后兔角膜VEGF的表达水平与新生血管的形成有明显的相关性，并在其中发挥了重要作用。靶向VEGF的干预治疗应该是今后眼部新生血管性疾病治疗的主要选择途径之一。
图1 角膜新生血管的形态学特征 术后1d ,可见角膜水肿,角巩膜缘血管轻度扩张充血(A)；术后3d,可见角巩膜缘处有新生血管芽呈刷状 (B)；术后5d,角巩膜缘处新生血管变长，顶端已出现分叉(C)； 术后7d,新生血管迅速增长，其顶端分叉更加明显，部分交织成网状，局部血管已侵入碱烧伤斑(D)；术后14d,角膜新生血管呈垂柳状，几乎占据整个角膜，同时新生血管也变得细而稀疏(E)（略）
图2 角膜VEGF蛋白质的表达差异（SP×400） 正常兔子角膜上皮层和内皮层有轻微VEGF阳性表达（棕色颗粒为阳性信号，箭头所示，A）；碱烧伤后24h,角膜上皮层VEGF呈染色阳性，（B）；角膜碱烧伤后3 d，角膜上皮层VEGF表达明显增强，基质层开始出现炎性细胞并表达VEGF（C）；碱烧伤后5 d，角膜组织中VEGF表达显著增强（D）；碱烧伤后7d，VEGF在角膜基质的表达水平降低（E）；碱烧伤后14d，角膜组织的VEGF表达水平明显降低（F）（略）
【参考文献】
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