【摘要】 目的：角膜共焦显微镜检查对兔碱烧伤角膜移植排斥反应进行研究，找寻排斥反应早期诊断的客观指标。
方法：制作兔角膜碱烧伤模型，36d后行穿透性角膜移植，于角膜移植术后4,9,14,21～28d诊断排斥反应时，角膜共焦显微镜检查角膜。
结果：排斥反应时角膜共焦显微镜检查见角膜植片炎性细胞浸润，角膜细胞丢失，新生血管生长。
结论：角膜共焦检查有助于早期诊断排斥反应。
【关键词】 角膜共焦显微镜；角膜移植；排斥反应
Early detection of high risk corneal graft rejection in rabbit by corneal confocal microscope
Ling Wang , Jie Wu , XiuPing Zhu , Hua Yang , Yong Yin
Ophthalmology Institute of Xian City, Xian 710002, Shaanxi Province, China
Abstract
AIM: To investigate the corneal graft rejection by alkali burned in rabbits corneal under corneal confocal microscope and to find a way of early detection on corneal graft rejection.
METHODS: Made a model of alkali burned in corneal of rabbits. At 36 days after alkali burning, penetrating keratoplasty was performed. Corneal confocal microscope was used to detect the corneal at day 4, 9, 14 and 34 weeks when the graft rejection was diagnosed after the operation.
RESULTS: Corneal cells loss, new vessels ingrowth, and inflammatory cells were detected in corneal at the time of rejection by corneal confocal microscope.
CONCLUSION: Corneal confocal microscope is useful in the early detection of corneal graft rejection.
KEYWORDS: corneal confocal microscope; corneal graft rejection; graft rejection
0引言
目前角膜疾病仍是致盲的主要原因之一。自1905年Zim成功的完成人类第1例同种异体穿透角膜移植手术以来，至今角膜移植手术已成为全身组织移植成功率最高的手术。然而术后的排斥反应仍是导致手术失败的头号并发症。尤其是高危角膜移植，术后排斥反应的发生率高达65%以上[1]。角膜移植排斥反应的机制仍未完全明了，早期诊断依然是临床上一个挑战性的问题。早期诊断对早期治疗及预后发挥着重要的作用。迄今早期诊断主要依据患者的主诉及临床检查（如视朦、移植片透明度改变等）作出综合判断。由于缺乏足够的活体的客观指标，该症的早期诊断与亚临床型诊断仍存在一定的困难，因而往往在明确诊断时角膜移植片的各层细胞（特别是内皮）细胞已遭到不可逆性的损害，此时虽能给予正确的治疗，但仍有相当比例的患眼植片破坏，从而导致移植手术的失败。我们建立兔角膜碱烧伤后高危角膜移植排斥反应模型，通过共焦显微镜对角膜植片进行动态活体的病理观察，探讨高危角膜移植排斥反应发生的机制，寻找早期诊断的客观指标。
1材料和方法
1.1材料 健康新西兰大白兔24只，由西安交通大学医学部动物实验中心提供，雌雄不限，体质量2.0～2.5kg。供体8兔16眼，受体16兔，随机分为2组，单眼选用，角膜碱烧伤组及正常对照组各8兔８眼。实验组兔角膜中央放置直径4mm被1mmol/L NaOH浸湿的滤纸片1min，大量生理盐水冲洗，造成兔角膜碱烧伤模型[2]。观察至36d。对照组及实验组烧伤36d时行穿透性角膜移植手术，速眠新Ⅱ注射液（长春军需大学兽医研究所），0.1～0.2ml/kg im麻醉，用直径6mm及6.5mm的环钻制备植床及植片，100缝线间断缝合，消毒空气形成前房。隔日裂隙灯检察。
1.2方法 角膜共焦显微镜（confoscan 3.0,Model P3）角膜移植术后4,9,14,21～28d进行检查及眼前节照相。移植片存活（是、否）；排斥反应发生（是、否），排斥反应诊断按照Holland 等[3]标准；植片上新生血管（有、无）；并发症：前房出血、虹膜后粘连、角膜穿孔、感染（有、无）。
2结果
碱烧伤后36d的共焦检查见角膜水肿明显消退，新生血管变细、变少。内皮面窥不清，基质层可见瘢痕，浅基质层可见少许炎性细胞及新生血管。角膜移植术后4d：对照组与实验组植片透明，创缘处轻度水肿，前房存在。角膜共焦检查实验组及对照组可见基质细胞水肿，基质层炎性细胞浸润，上皮基底层结构大致正常（图1A,B）。角膜移植术后9d： 对照组及实验组植片均透明，实验组少许细小新生血管顺缝线生长。对照组及实验组植片均见基质层结构紊乱，基质细胞肿胀，细胞数目减少，实验组较对照组细胞外炎性渗出明显。角膜移植术后14d：对照组植片中央透明，创缘处灰白色瘢痕形成。实验组植片中央透明，创缘处灰白色呈环状扩展，部分细小密集的新生血管顺缝线长入植片。实验组及对照组见基质细胞肿胀，基质层瘢痕形成，实验组较对照组角膜基质细胞减少，实验组植片周边可见细小新生血管。角膜移植术后21～28d：对照组植片透明，创缘处淡灰色浑浊。实验组：创缘处浑浊灶向植片环行扩展，植片创缘处水肿,新生血管明显长入植片。对照组所见大致同角膜移植术后14d（图2A）。实验组：内皮面窥不清，基质层水肿，基质细胞减少，细胞肿胀，基质层瘢痕形成，细胞外渗出明显，基质层及上皮层较多炎性细胞浸润（图2B）。植片边缘可见粗大新生血管，管腔内可见较多炎性细胞，反光较强。
图1角膜移植术后4d角膜共焦显微镜检查（略）
A:对照组基质细胞肿胀，边界不清，炎性渗出，少许炎性细胞浸润;B:实验组基质细胞肿胀，可见炎性细胞浸润
图2角膜移植术后21～28d角膜共焦显微镜检查（略）
A:对照组基底膜细胞完整，浅基质层细胞减少;B:实验组可见新生血管，炎性细胞浸润
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