3  讨论

    视网膜微血管的渗漏是DR的重要环节。本实验以聚碳酸酯微孔滤膜为载体，形成的EC单层更接近生理状态[9]，能较好地模拟体内高糖对视网膜微血管渗漏的影响。通过Kf和δ这两个反映EC单层通透性最敏感的指标[9]，可以对EC单层通透性模型进行检测，灵敏地反映EC单层通透性的变化，同时也可以更准确地推测各处理因素对在体实验的作用效果。

    Kf和δ的检测结果显示，与正常对照组相比，高糖组δ有所降低，Kf有所增加，显示EC单层通透性增加。高糖可以直接刺激糖酵解途径造成细胞损伤[10]，可导致EC内还原型烟酰胺腺嘌呤NADH堆积，产生功能性缺氧，造成EC因代谢供氧不足受到损伤[11]。高浓度葡萄糖造成的EC单层通透性增强，很可能是由于EC凋亡增加导致滤膜表面存活的细胞减少，细胞间隙增大，原本致密的EC单层受损所致。

    实验中Ang-高糖组survivin表达明显高于其他两组。survivin是迄今发现的最强的凋亡抑制因子，其抑制细胞凋亡的作用远大于Bcl-2家族成员[12]。Ang-1可以通过激活跨膜的信号传导路径PI3K/Akt，抑制线粒体酶释放，上调凋亡抑制基因survivin的表达，拮抗内皮细胞调亡[13-14]。本实验中Ang-高糖组survivin表达明显高于其他各组，这表明Ang-1也能上调高糖环境中EC survivin的表达。Ang-1能降低高糖环境中EC单层通透性，原因很可能是由于凋亡抑制基因survivin表达上调，细胞凋亡减少，滤膜表面存活的细胞较多，EC单层受损减少，EC单层通透性较低。也可能是由于Ang-1促进血小板内皮细胞黏附分子-1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1，PECAM-1)在细胞连接处的聚集，降低E-选择素的表达，降低VE-钙黏附素和PECAM-1的磷酸化，抑制TNF介导的白细胞游出，抑制内皮细胞凋亡[15]，从而降低了高糖环境中EC单层的通透性。但是在40 mmol/L的浓度高糖环境中，Ang-1这种保护作用具有时间依赖性，第3 天时，Ang-高糖组与正常对照组EC单层通透性组间无差异，第5天和第7天Ang-高糖组EC单层通透性居于正常对照组和高糖组之间。

    葡萄糖能造成EC损伤，使EC单层通透性增高；而Ang-1能对抗葡萄糖的这种生物学作用，但是具有时间依赖性。这种对抗作用有很多的可能机制，都有待于进一步研究。

    【参考文献】

[1] Frank RN. On the pathogenesis of diabetic retinopathy. A 1990 update[J]. Ophthalmology，1991，98(5)：586-593.

[2] Korhonen J， Partanen J， Armstrong E， et al. Enhanced expression of the tie receptor tyrosine kinase in endothelial cells during neovascularization[J]. Blood，1992，80(10)：2548-2555.

[3] Maisonpierri PC， Goldfarb M， Yancopoulos GD， et al. Distinct rat genes with related profiles of expression define a Tie receptor tyrosine kinase family[J]. Oncogene，1993，8(6)：1631-1637.

[4] Thurston G， Rudge JS， Loffe E， et al. Angiopoietin-1 protects the adult vasculature against plasma leakage[J]. Nat Med，2000， 6(4)：460-463.

[5] Thurston G， Suri C， Smith K， et al. Leakage-resistant blood vessels in mice transgenically overexpressing angiopoietin-1[J]. Science，1999，286 (5449)：2511-2514.

[6] Gamble JR， Drew J， Trezise L， et al. Angiopoietin-1 is an antipermeability and anti-inflammatory agent in vitro and targets cell junctions[J]. Circ Res，2000，87(7)：603-607.

[7] Postlethwaite AE， Snyderman R， Kang AH. The chemotactic attraction of human fibroblasts to a lymphocyte-derived factor[J]. Exp Med，1976，144(5)：1188-1203.

[8] 丁自强，李少华，吴中立． 白蛋白对内皮细胞单层屏障功能的增强作用[J]． 中国病理生理杂志，1994，10（3）：231-234．

[9] 穆亚妹，杜冠华． 血管内皮细胞体外培养方法的研究进展[J]. 国外医学药学分册，2004，31（6）：361-365．

[10] La Selva M， Beltramo E， Pagnozzi F， et al. Thiamine corrects delayed replication and decreases production of lactate and advanced glycation end-products in bovine retinal and human umbilical vein endothelial cells cultured under high glucose conditions[J]. Diabetologia，1996，39(11)：1263-1268.

[11] Williamson JR， Chang K， Frangos M， et al. Hyperglycemic pseudohypoxia and diabetic complications[J]. Diabetes，1993，42(6)：801-813.

[12] Ambrosini G， Adida C，Altieri DC. A novel anti-apoptosis gene，survivin expressed in cancer and lymphoma[J]. Nat Med， 1997，3(8)：917-921.

[13] Hadouche R， Hassessian HM， Guo Y， et al. Mechanisms which mediate the antiapoptotic effects of angiopoietin-1 on endothelial cells[J]. Microvasc Res，2002，64(1)：135-147.

[14] Papapetropoulos A， Fulton D， Mahboubi K， et al. Angiopoietin-1 inhibits endothelial cell apoptosis via the Akt/survivin pathway[J]. J Biol Chem，2000，275(13)：9102-9105.

[15] Gamble JR， Drew J， Trezise L， et al. Angiopoietin-1 is an antipermeability and anti-inflammatory agent in vitro and targets cell junctions[J]. Circ Res，2000，87(7)：603-607.

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