【摘要】 目的：观察中药刺蒺藜对高眼压兔视网膜神经节细胞(RGCs)的作用。方法：将16只健康新西兰兔随机分为正常组（A组）、高眼压组（B组）和高眼压治疗组(C组)，以20g/L甲基纤维素前房注射建立B，C组兔慢性高眼压模型，C组予以每日静脉注射刺蒺藜针剂5mg/kg，连续用药30d后摘取眼球进行RGCs观察及视网膜神经纤维层(RNFL)厚度测量。结果：造模后各组眼压均有升高，HE染色切片中C组RGCs变性程度及RNFL受损程度明显低于B组（P<0.01）。
结论：中药刺蒺藜能在一定程度上保护高眼压状态下的视网膜神经节细胞。
【关键词】 刺蒺藜；高眼压；视网膜神经节细胞；兔
Effect of tribulus terrestris L. on the retinal ganglion cells
MingYi Liao,LiNa Huang, Ping Zeng, Jun Liu
1Hubei College of Traditional Chinese Medicine, Wuhan 430061, Hubei Province, China;
2 Shenzhen Eye Hospital, Shenzhen 518001, Guangdong Province, China
AbstractAIM: To observe the effect of tribulus terrestris L. （TTL) on the retinal ganglion cells(RGCs) with experimental hyperintraocular pressure（HIOP）.METHODS: Sixteen healthy NZ rabbits were randomly divided into 3 groups: normal group（A）; HIOP group（B）; HIOP treatment group（C）. HIOP was induced by 20g/L methylcellulose injection into the anterior chamber with HIOP group．Treatment group was injected 5 mg/kg TTL every day. After 30 days, the rabbits globes were removed for RGCs observed by light microscopy，and the thickness of retina layer was examined. RESULTS: Hyperintraocular pressure occurred in all of rabbits, the degeneration of RGCs and the retinal nerve fiber layer in the C group was lower than those in the B group .CONCLUSION: TTL. may protect RGCs in some extent.
KEYWORDS: tribulus terrestris L.；hyperintraocular pressure；retinal ganglion cells；rabbit
0引言
刺蒺藜为蒺藜科蒺藜属植物，具有活血通络、平肝潜阳、祛湿化痰、宣痹通阳、补益肝肾等功效。历代本草多有记载，《本经》：“蒺藜味苦温，久服明目，轻身”。叶天士等注释：“刺蒺藜久服而肝木攸畅，肝开窍于目，故目明”。《中国药典》载述，“蒺藜具平肝解郁，活血祛风，明目，止痒功能。用于头痛眩晕，胸胁胀痛，目赤翳障”[1]。但一直以来，蒺藜明目之功效研究不多。200711/12我们将刺蒺藜应用于对验性高眼压兔，观察其对视网膜神经节细胞的作用。
1材料和方法
1.1材料
体质量2.0～2.5kg的健康新西兰白兔16只，雌雄各半，由广东省医学动物实验中心提供。造模前检查眼前节及眼底无异常，用Schiotz眼压计连续测量眼压3d，1次/d ，眼压均<21mmHg（1mmHg=0.133kPa）的动物方可采用。吉林敖东洮南药业提供注射用刺蒺藜粉剂。
1.2方法
选用对眼压无明显影响的30g/L戊巴比妥钠1mL/kg肌注麻醉，眼部表麻后抽出前房房水0.2mL，A组4兔4只右眼注入生理盐水，B，C组各6兔6只右眼等量注入20g/L甲基纤维素[2]。如模型眼在实验周期中眼压有所下降，即予以补注，使其观察期内眼压均维持在32～39mmHg。将C组动物称重，按5mg/kg(约等于成人用量)将刺蒺藜粉剂溶于9g/L生理盐水中，予以耳缘静脉注射，1次/d。A组及B组均不给药。采用Schiotz眼压计双砝码对读法，分别于造模前3d、造模后30min、造模后每日测量眼压并记录，共计1mo。慢性高眼压持续30d后以耳缘静脉注气法处死动物，角膜缘12h方位缝线定位，摘取眼球并平行于视神经纵向剖开，去除眼内容物，中性甲醛固定24h，常规石蜡包埋，通过视神经做5μm常规切片3张，以苏木素—伊红(HE)染色，观察神经节细胞结构变化，并以图像分析仪测量神经纤维层厚度(RNFL），规定部位为视盘下方1．5mm处，200倍视野范围内随机测量3次取均值。
统计学分析： 用SPSS 13.0软件包进行分析，各组数值用均数±标准差(±s)表示，组间比较采用方差分析。
2结果
2.1一般临床观察
B，C组模型眼注射甲基纤维素后，均出现睫状体充血、角膜水肿、房水混浊、眼球变硬等青光眼体征，而A组未出现明显的上述改变。实验过程中，模型眼眼压始终维持在32～39 mmHg。
2.2眼压
各组眼压比较，造模前3组眼压均在正常范围，组间无显著差异，造模后30min均升高，分别为A组35.63±2.52mmHg，B组37.26±2.24mmHg，C组36.89±2.13mmHg，由于A组右眼注射的是生理盐水，造模后眼压暂时性升高，经循环代谢后降至正常，为12.43±2.06mmHg。
2.3光镜检查
3组兔在造模4wk后RNFL厚度的比较：A组34.24±2.12μm，B组28.04±1.56μm，C组32.84±1.30μm。各组间比较P<0.05。镜下见正常兔的视网膜组织结构清晰、完整，可观察到10层结构，外核层细胞数量最多，内核层细胞数量较少，节细胞为单层，形态呈类圆形[3]。B组视网膜内层变薄，神经节细胞数量明显减少，细胞出现空泡样变性，内、外核层细胞排列稀疏，数量减少。C组损伤明显轻于B组，神经节细胞数量有所减少,胞核大部分存在，部分出现空泡样变，内核层和外核层结构与正常组基本相似。
3讨论
青光眼属中医“五风内障”范畴，现代中医认为其基本病机为气血失和，目中玄府闭阻，脉络不利，神水瘀滞，治疗通常以化瘀、通络、开窍、利水为主。有研究表明，青光眼的发病机制可能有血流异常参与[4]。已证实某些中药具有促进微循环、降低血液黏滞度、提高机体抗氧化能力等多方面的药理作用，在改善青光眼视神经轴浆流、视盘供血情况等方面有明显优势[5]。中药刺蒺藜临床用于防治心血管疾病20余年，已证实有降低血压、降血脂、舒张血管、抗血小板聚集、抗缺氧和保护离体心脏缺氧再给氧损伤等作用[6]。本实验选用注射用刺蒺藜粉剂，通过静脉给药方式用于高眼压兔，观察其对高眼压下RGCs的保护作用，经检测发现，其在一定程度上减轻高眼压状态下的RGCs凋亡，机制可能与改善视盘供血情况、清除自由基、提高机体抗氧化能力等多因素有关[7]，这一发现初步证实刺蒺藜有明目之功效，可为祖国医学保护视神经、治疗青光眼开辟新途径，但详细机制有待于后续研究。
【参考文献】
1葛坚.现代青光眼研究进展.北京：科学出版社 2000:64
2郭艳，殷惠军，史大卓，等.白蒺藜及其有效成分在心血管疾病中的应用进展.中西医结合心脑血管病杂志 2005;2：206207
3李德姣，蒋伯龄，朱元莉,等.当归补血汤对实验性高眼压兔视网膜神经节细胞保护作用的研究. 中国中医眼科杂志 2004；2：7376
4杨新光，王昌鹏，王晓娟，等.藏红花对慢性高眼压下兔眼视网膜神经节细胞的保护作用．中华眼底病杂志 2007;23（3）：206207
5陆士恒，柳林.视网膜神经节细胞保护的药物治疗．国际眼科杂志 2008；8（3）：568570
6钱本余.蒺藜研究概述.中成药 1990；12（1）:34
7 Wein FB, Levin LA. Current understanding of neuroprotection in glaucoma. Curr Opin Ophthalmol 2002;13(2)：6167
|
