眼科研究 2000年第4期第18卷 实验研究
作者：刘学政 萧鸿 魏广生 曲维新
单位：刘学政（121001锦州医学院解剖学教研室）；萧鸿 魏广生 曲维新（锦州医学院第一附属医院）；李瑞祥 李春丽（华西医科大学解剖教研室）
关键词：糖尿病视网膜病变；光感受器；超微结构；链脲佐菌素
摘要 目的探讨早期糖尿病视网膜病变光感受器超微结构变化。方法选择健康成年Wistar大鼠32只，随机分成正常对照组、糖尿病1,3月和6月组。55mg／kg体重一次性腹腔内注射链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病。取大鼠视网膜制备超薄切片，透射电镜观察并计算机图像分析。结果病程1月只见视杆细胞膜盘模糊不清，膜盘间隙略有扩大；病程3月时，膜盘间隙扩大明显，并发生局部断裂溶解。视杆细胞核固缩、异染色质浓集。视杆内节线粒体肿胀、甚至空泡变性。病程6月时，以上改变更加严重。结论糖尿病视网膜病变早期大鼠出现光感受器的形态变化，随病程进展，呈现逐渐加重的趋势。
分类号 R774
Ultrastructural changes of photoreceptors of early diabetic rats
Liu Xuezheng Xiao Hong Wei Guangsheng et al．
（Department of Anatomy，Jinzhou Medical College，Jinzhou 121001）
Abstract ObjectiveTo investigate ultrastructural changes of photoreceptors in early diabetic retinopathy（DR）．Methods32 healthy adult Wistar rats were chosen and divided into normal control group，diabetes mellitus one month（DM 1），three-month（DM3） and six-month（DM6） group．Diabetic rats were induced by 55mg／kg streptozotocin（STZ） once intraperitoneally．Superthin sections made from rat retinas were stained with heavy metals and observed under transmission electron microscope and then analyzed by electronic computer-picture analytical system．ResultsIn DM1，membrane disks of rods were only obscure and their spaces were enlarged slightly．In DM3，the membrane disk spaces were enlarged obviously with breaking and dissolving locally；rod cell nuclei showed pyknosis and chromatin condensed；condrocytes of inner segments of rods swelled and even denatured．In DM6，all the above changes appeared more seriously．By computer-picture analyzing，the O／M values of DM1，DM3 and DM6 were 0.108±0.024，0.197±0.140 and 0.247±0.107，respectively．ConclusionIn the early stage of diabetic retinopathy，the morphological changes emerge in photoreceptors．The principal changes include membrane disks of rods being obscure，spaces enlarging and even breaking and dissolving locally，rod cell nuclei showing pyknosis and their chromatin condensing．Along with the progression of diabetic retinopathy，pathological alterations get worse gradually．
Key words diabetic retinopathy photoreceptor ultrastructure streptozotocin
多年来，对糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）发病机理的研究多集中于视网膜毛细血管病变上，而对视网膜神经组织的病变涉及较少。最近，Holopigian等［1］的研究发现糖尿病病人的光感受器功能出现异常。本实验应用链脲佐菌素（STZ）诱导的大鼠糖尿病模型在透射电镜下研究早期DR大鼠光感受器的超微结构改变，为进一步探索DR发病机理及其致盲机制提供形态学资料。
1 材料与方法
1．1 动物模型建立
1．1．1 实验动物及饲养
封闭群Wistar大鼠32只（华西医大实验动物中心提供），雌雄不拘，体重220～310g。随机分成正常对照组、糖尿病1月（DM1）、3月（DM3）和6月（DM6）组。每组8只。标准颗粒饲料喂养，不限食水。自然昼夜光线照明。室内通风良好，氨浓度小于20 ppm，相对湿度40％～70％，室温18～22℃。
1．1．2 STZ诱导大鼠糖尿病模型
以0.1mol／L，pH 4.2的柠檬酸缓冲液溶解STZ，（德国Boehringer-Manmheim公司）配制成1%STZ溶液，按55mg／kg体重一次性大鼠腹腔内注射STZ，24～48h后检查尿糖和血糖。尿糖在＋ ＋ ＋以上，血糖＞16.65mmol／L者为糖尿病大鼠。此后每周测1次尿糖、每月检测1次血糖。
1．2 视网膜超薄切片制备及透射电镜观察
过量戊巴比妥钠麻醉，处死大鼠，立即摘除眼球，用3%戊二醛溶液固定。充分水洗后，于角膜缘后0.5mm处沿赤道方向切开眼球，剥离出视网膜，以磷酸缓冲液冲洗30min。1%四氧化锇固定1h。逐级酒精脱水，环氧树脂包埋，制备超薄切片，醋酸双氧铀与枸椽酸铅双重染色。日产JEM-1200EX透射电镜观察。
1．3 电子计算机图像测定和统计分析
应用MIAS图像分析系统（四川大学图像图形研究所）测定各病程糖尿病大鼠视杆膜盘间隙面积与膜盘面积比（O／M），其结果行方差分析与q检验。
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