高彦   周庆军   史伟云

山东省眼科研究所   266071

目的：探讨人胚胎角膜内皮细胞条件培养液（conditioned medium of human embryonic corneal endothelial cells）对人胚胎角膜内皮细胞（human embryonic corneal endothelial cells）体外生长增殖的影响。

方法：将生长汇合达80%的原代hECECs用0.125g•L-1胰酶/0.53 mmol•L-1EDTA传P1代分5组接种于96孔板，第2天换DMEM/F12 含10%FBS（对照组）、和hECECs-CM(按1∶1，1∶2，1∶4，1∶8体积比稀释)；MTT法检测细胞增殖情况；免疫荧光法及PCR法对hECECs进行初步鉴定；BCA蛋白定量试剂盒检测胚胎角膜基质细胞条件培养液中蛋白含量；SPSS 11.5软件包对数据进行统计学分析。

结果：MTT法检测DMEM/F12含10%FBS和4组hECECs-CM培养的OD值分别为0.1491±0.013367、0.42386±0.012224、0.39148±0.061322、0.35958±0.05636和0.33684±0.037544，多组方差分析显示，1∶1 hECECs-CM组与1∶4，1∶8 hECECs-CM和对照组两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）；免疫荧光结果显示hECECs呈NSE、nestin和Ki67抗体染色阳性；PCR检测Na-K-ATP酶和ZO-1基因水平表达高于角膜基质细胞；BCA蛋白定量结果显示hECECs-CM中总蛋白浓度为1347.25mg•L-1，按推算含650 mg•L-1蛋白成份的hECECs-CM对角膜内皮细胞的增殖有促进作用。

结论：hECECs-CM对hECECs的体外生长增殖有促进作用，其应用和其中活性成份分析有待进一步的研究。