2  结果

　　2.1  组织形态学观察
   
　　对照组大鼠出生后25 d时，视网膜各层结构整齐，细胞形态规则;35 d时，外核层变薄，细胞密度降低;45 d时，外核层进一步变薄，细胞密度降低，细胞形态不规则，但内核层及节细胞层改变不明显。与对照组比较，治疗组大鼠25 d及35 d时，视网膜外核层明显增厚，细胞密度增加。

　　2.2  细胞凋亡检测
   
　　对照组RCS大鼠出生后25 d时，视网膜外核层可观察到少许TUNEL染色阳性细胞；35 d时，TUNEL染色阳性细胞增加；45 d时，阳性细胞减少。治疗组RCS大鼠出生后25、35 d时，外核层也可以观察到TUNEL阳性表达细胞，与对照组相比，差异有统计学意义（t=3.33、6.72，P<0.05）。见表1。

　　2.3  Caspase²2表达
   
　　对照组和治疗组RCS大鼠出生后35～45 d，在节细胞层和内核层均观察到Caspase²2阳性染色。治疗组RCS大鼠在25 d时Caspase²2阳性表达低于对照组（t=6.33,P<0.05）。见表2。

　　3  讨论
   
　　表1  两组TUNEL阳性表达比较（略）

　　与对照组比较,#t=3.33,P<0.05;*t=6.72,P<0.05

　　表2  两组Caspase²2阳性表达比较（略）

　　与对照组比较，*t=6.33,P<0.05
   
　　自1857年DANDERS首次报道视网膜色素变性以来，众多学者对此进行了广泛的研究。但该病一直没有有效的治疗方法。目前对视网膜色素变性的治疗方法主要有： 基因治疗、感光细胞移植、药物干预。前两种方法因存在目前尚难解决的一些技术问题使其应用受到很大限制，而药物干预则显示了良好的应用前景。
   
　　目前，有很多研究的焦点集中到了枸杞子对眼睛的治疗作用。香港大学2006年的研究显示，LBA对青光眼的RGCs有神经保护作用，首次在体内实验中证明枸杞子可以显著减少眼内高压模型大鼠RGCs 的凋亡[4]。在本实验中， 苏木精²伊红染色观察显示，治疗组RCS大鼠在出生后25、35 d时外核层的厚度及细胞密度大于对照组。TUNEL染色结果显示,治疗组RCS大鼠在出生后25、35 d时的细胞凋亡较对照组明显减少，这一结果提示LBA在RCS大鼠感光细胞变性的早期对感光细胞可能有保护作用。本实验结果还显示，45 d时治疗组与对照组视网膜外核层的厚度和细胞的密度无明显差异，这与TUNEL染色结果相似，其原因可能是由于RCS大鼠出生后25 d感光细胞发生凋亡，35 d是感光细胞凋亡的高峰期,随着感光细胞的凋亡，外核层细胞数目减少。
   
　　Caspase 即半胱氨酸天冬氨酸酶,通常以无活性的蛋白酶原形式在细胞内合成和分泌[4]。在放射线、氧化损伤、缺血、低氧等诱导凋亡信号的刺激下,酶原形成四聚体而活化,形成 Caspase 活化级联反应。Caspase 一经激活裂解其作用底物,细胞凋亡便不可逆地进入实施阶段,并以细胞解体、凋亡小体形成而告终。本实验中，治疗组和对照组RCS大鼠生后25～45 d在视网膜节细胞层和内核层均观察到Caspase²2阳性染色,治疗组大鼠出生后25 d内核层 Caspase²2阳性表达的平均吸光度小于对照组；两组大鼠内核层Caspase²2阳性表达在35 d达到高峰,其趋势与 TUNEL染色结果相一致。提示LBA在RCS大鼠感光细胞变性的早期对感光细胞有保护作用，其机制可能与抑制 Caspase²2蛋白的表达有关。

　　【参考文献】

　　[1]BOURNE M C, CAMPELL D A, TANSLEY K. Hereditary degeneration of the rat retina[J]. Br J Ophthalmol, 1938,22:613²623.

　　[2]HIU²CHI C, RAYMOND C. Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma[J]. Experimental Neurology, 2007,20:269²273.

　　[3]周晓彬,纪新强,徐莉. PPMS 1.5统计软件的功能及其应用[J]. 青岛大学医学院学报, 2009,45(1):91²93.

　　[4]陶涛,迟焕芳,曹文强. 金纳多对 RCS 鼠视网膜色素变性神经元保护作用[J]. 青岛大学医学院学报, 2007,43(2):156²158.

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