作者：张文霁，韩泉洪，惠延年，马吉献

　　关键词: 玻璃体视网膜病，增生性;T淋巴细胞;HLA-DR抗原;免疫组化染色

　　摘 要:目的  研究免疫介导过程在增生性玻璃体视网膜病变（PVR）发生中的作用. 方法  应用特异性单克隆抗体和免疫组织化学染色的方法对视网膜玻璃体手术取材标本，包括PVR B级玻璃体手术集取物以及PVR C，D级增生膜进行观察，检测其中CD3 ，CD4 ，CD8 和HLA-DR的表达情况. 结果  7例PVR B级的标本中，6例（85.7%）有CD3 阳性表达细胞，其中2例（28.5%）同时有CD4 阳性细胞，未发现CD8 阳性细胞，2例（28.5%）有HLA-DR阳性表达细胞存在.14例PVR C级以上的增生膜标本中，CD3 均为阳性表达，10例（71.4%）有CD4 阳性表达细胞，5例（35.7%）有CD8 阳性表达，9例（64.3%）有HLA-DR阳性表达. 结论  PVR病变组织及增生膜有T淋巴细胞的存在，提示有T细胞参与PVR的病变过程，及自身免疫反应的可能.
    
　　T┐lymphocytes and HLA┐DR antigens in specimens of proliferative vitreoretinopathy
    
　　ZHANG Wen-Ji，HAN Quan-Hong，HUI Yan-Nian，MA Ji-Xian
    
　　Department of Ophthalmology，Xijing Hospital，Fourth Military Medical University，Xi'an710033，China
     
　　Keywords:vitreoretinopathy，proliferative;T-lymphocytes;HLA-DR antigens;immunohistochemical stain-ings
    
　　Abstract:AIM To investigate inflammatory and immune-mediated processes contributing to the pathogenesis of prolif-erative vitreoretinopathy（PVR）.METHODS Specimens were obtained during vitrectomy，including fluid collections of PVR grade B，and peri-retinal membranes from PVR grade C or D.Immunohistochemical staining was performed to examine the presence of CD3 ，CD4 ，or CD8 markers and（human leukoiyte antigen，HLA）HLA-DR positive cells in these specimens.RESULTS CD3 positive cells were found in6of7specimens of PVR B grade，and CD4 positive cells were present in2of the6CD3 positive specimens.CD8 markers ex-pression was negative in all7specimens.Positive staining for HLA-DR was found in2specimens.In14PVR C，D mem-branes，lymphocytes expressing CD3 markers were observed in all，whilst T lymphocytes expressing CD4 and CD8 markers were found in10and5of14membranes，respectively.Posi-tive staining for HLA-DR was found in9of14membranes.CONCLUSION Findings indicate that T lymphocytes are present in PVR membranes and may be activated.These cells may play a potential role in the development of PVR.
    
　　0 引言
   
　　增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreo-retinopathy，PVR）是裂孔源性视网膜脱离手术失败的主要原因.PVR属于眼内发生的过度损伤修复过程，经历炎症期、增生期和瘢痕期三个阶段，是一个以巨噬细胞和淋巴细胞等炎症细胞浸润为主的慢性炎症反应［1，2］ .巨噬细胞诱发的PVR模型对巨噬细胞在PVR中的作用进行了较好阐明［3］ ，但Gabrilian K等证实了在PVR的病理过程中其它类型白细胞有不可替代的作用［4］ .本实验利用免疫组化技术，观察不同时期PVR病变组织中T细胞表面标记物CD3 ，CD4 ，CD8 以及人白细胞抗原HLA-DR的表达情况，以进一步探讨PVR的发病机制.
    
　　1 材料和方法
    
　　1.1 材料 

　　标本来源于1997-09/2000-03在西京医院眼科住院的孔源性视网膜脱离伴PVR患者21名.患者无先前存在的眼内炎症性疾病.PVR分级标准参照1983年美国视网膜学会分级方法.其中7例PVR B级取玻璃体切割液集取物，离心沉淀后取沉淀物;14例PVR C级以上患眼行玻璃体切割术时取视网膜表面增生膜标本，其中下膜5例，前膜9例.以上组织用40g・L-1 多聚甲醛固定30min，4℃.经脱水、透明和浸蜡，制成蜡块.最后制成5μm厚的切片，贴附于载玻片上.
    
　　1.2 方法 

　　①抗体和试剂:小鼠抗人CD3 ，CD4 ，CD8 和HLA-DR单克隆抗体，ABC免疫组化试剂盒均购自中国博士德公司;②免疫组织化学染色:切片浸入7.5mL・L-1 H2 O2 -PBS，37℃30min，以阻断内源性过氧化物酶.羊血清（1∶200）封闭消除非特异性染色.滴加小鼠特异性抗体CD3 （1∶100），CD4 （1∶200）CD8 （1∶100），HLA-DR（1∶100）.湿盒，37℃孵育30min.PBS振洗3次，滴加生物素化羊抗小鼠IgG（1∶200），湿盒，37℃孵育30min.滴加ABC复合剂，37℃孵育30min.DAB显色，镜下观察，水洗中止反应，苏木精复染核，脱水透明封片.
   
　　采用扁桃体切除术后的新鲜人扁桃体组织作为阳性对照;采用人角膜移植后供体眼的眼后段组织，包括视网膜色素上皮（RPE）细胞、视网膜组织、脉络膜和巩膜，以及不加一抗的标本作为阴性对照，与手术取材标本平行染色.以背景清晰、棕黄色部位定位明确的细胞作为阳性细胞.
     
　　2 结果
    
　　阳性对照组显示所用的所有单克隆抗体均呈阳性反应，阳性细胞胞质中呈现棕色或深棕色的颗粒，细胞核经复染成蓝色.阴性对照组中未见阳性染色.在7例PVR B级组织中，6例（85.7%）有CD3+ 细胞，阳性表达的细胞散在分布，呈典型的淋巴细胞形态（Fig1）;其中2例（28.5%）有CD4 和CD3 同时阳性表达细胞;在7例中CD8 均为阴性表达;2例中存在HLA-DR+ 细胞（Fig2），其中1例同时有CD3+ 细胞，另1例同时有CD3 和CD4 阳性表达，HLA-DR表达阳性的细胞呈卵圆形，细胞核较圆，并可见少量的色素.
   
　　在14例PVR C级以上的增生膜标本中，14例均为CD3+ 表达，阳性染色的T淋巴细胞存在于组织基质中，呈典型的淋巴细胞形态（Fig3）;CD4+ 细胞存在于10例中（71.4%），其中4例同时有CD8 阳性表达，8例同时有HLA-DR阳性表达，HLA-DR+ 细胞在增生膜的表面呈稀疏分布，细胞多为长梭型，细胞核为卵圆形（Fig4）;在CD4 阴性表达的4例中，1例同时有CD8 阳性表达，1例同时有HLA-DR阳性表达.

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