Significance of PTEN protein expression of in retinoblastoma
【Abstract】 AIM: To investigate the expression of PTEN protein in retinoblastoma and its clinical significance. METHODS: Expression of PTEN protein was detected in 36 specimens of retinoblastoma and 10 specimens of normal retina using SP immunohistochemistry. RESULTS: The positive rate of PTEN protein（21 cases, 58.3%） in retinoblastoma was much more frequent than that of normal retina (0%, P=0.0000) and the expression level of PTEN varied between the pathology grades (differentiated 73.7%; undifferentiated 41.2%, P<0.05) and among the clinic stages (stageⅠ 75.0%; stage Ⅱ 62.5%; stage Ⅲ 41.7%, P<0.05). The higher the pathology grade and the clinical stage of tumors, the lower the expression of PTEN protein. CONCLUSION: The abnormal expression of PTEN protein may play an important role in the development of retinoblastoma. Detection of PTEN protein may be useful for the assessment of retinoblastoma development and its prognosis.
【Keywords】 retinoblastoma; PTEN protein; immunohistochemistry
【摘要】 目的: 探讨PTEN蛋白在视网膜母细胞瘤(RB)组织中的表达及临床意义. 方法:采用免疫组化SP法观察36例RB和10例正常视网膜组织石蜡标本中PTEN的表达情况. 结果:21例(58.3%) RB组织中PTEN蛋白表达阳性，与正常视网膜组织相比(0%)存在显著性差异(P=0.0000). PTEN蛋白在分化和未分化RB组织中的表达率分别是73.7%和41.2%（P<0.05）；在Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ期RB组织中的表达率分别是75.0%，62.5%和41.7%（P<0.05）. 随肿瘤细胞病理分型、临床分期的增高, PTEN蛋白阳性表达率明显降低. 结论:PTEN蛋白异常表达在RB的进展中有重要作用,检测PTEN的表达有助于判断病情与预后.
【关键词】 视网膜母细胞瘤; PTEN蛋白; 免疫组化
0引言
视网膜母细胞瘤(retinoblastoma, RB)是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤. 由于临床RB的发现大多处于中晚期,治疗多为手术摘除眼球及眼外粒子束放射治疗. PTEN是抑癌基因,在多种进展期肿瘤中均有突变,其突变或杂合性缺失与恶性胶质瘤、前列腺癌等多种肿瘤的发生发展有密切关系. 但其与RB的关系尚未见报道. 我们通过对RB组织中PTEN蛋白水平的检测,探讨PTEN与RB发生发展之间的关系.
1材料和方法
1.1材料
RB组织36例和正常视网膜组织10例198001/200408存档蜡块,男24例,女12例,年龄1～11（平均3.6）岁. 临床分期：眼内期(Ⅰ期)9例,青光眼期(Ⅱ期)15例,眼外期(Ⅲ期)12例; 肿瘤病理学分型：分化型19例,未分化型17例.
1.2方法
判定免疫组化染色采用SP法. PTEN蛋白抗体及免疫组化试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司. 用已知阳性片作为阳性对照,PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照. 显微镜下观察实验结果. 结果判定标准: PTEN阳性染色为肿瘤细胞膜及细胞质内见棕褐色颗粒,根据癌细胞染色程度和范围判断. 阴性(-):整个切片未见阳性染色;轻度阳性(+):阳性细胞<26%;中度阳性():阳性细胞26%～50%;强阳性():阳性细胞>50%.
统计学处理：采用SPSS 10.0统计软件对数据进行χ2检验及Spearman等级相关分析,检验水准α=0.05.
2结果
PTEN蛋白染色阳性反应信号呈棕黄色细小颗粒,位于细胞质内. 正常视网膜组织PTEN蛋白表达阳性率100%,RB组织PTEN蛋白表达阳性率58.3%(21/36). 结果表明, PTEN蛋白在RB组织中的表达较正常组织低,两者差异有统计学意义(P<0.05). RB组织PTEN蛋白的表达与临床分期和肿瘤病理分型等相关（Tab 1）.表1RB组织PTEN蛋白表达与临床病理的关系（略）
3讨论
PTEN是Li等［1］于1997年发现的一种新的抑癌基因,该基因在多种人类肿瘤中存在突变、缺失,被认为是继p53基因之后发现的又一重要的抑癌基因. PTEN基因定位于10q23.3,由9个外显子和8个内含子组成. 迄今已发现PTEN在多种肿瘤如恶性胶质瘤、前列腺癌、乳腺癌中频繁发生突变［2,3］并可诱导SHG44人脑胶质瘤细胞凋亡［4］,其基因突变导致PTEN蛋白磷酸酶活性降低,使PIP2向PIP3的转化发生逆转,阻断了丝苏氨酸激酶(Akt)及其下游激酶的活性,使细胞恶性增殖增强,细胞凋亡活动失去控制;对肿瘤细胞的负调控作用受到抑制而使细胞发生迁移,以局部黏附的形式调节肿瘤细胞的浸润和转移［5］. 我们应用免疫组化技术检测了正常视网膜组织和RB组织中PTEN蛋白的表达,结果显示PTEN蛋白阳性信号主要位于细胞质,极少数细胞呈核阳性. 10例正常视网膜组织均呈PTEN蛋白阳性;RB组织PTEN蛋白表达阳性率58.3%. 提示PTEN蛋白失表达促进了RB的发生、发展,检测PTEN蛋白的表达可作为RB发生的监测指标. RB组织中PTEN表达与临床分期有关,眼外期PTEN表达明显低于青光眼期和眼内期,可能在RB的发生过程中, PTEN基因失活起着重要作用. PTEN蛋白表达与肿瘤的分化有一定关系，国内有学者在PTEN表达与子宫内膜癌临床病理特征的分析中发现, PTEN在不同病理分级的子宫内膜癌中的表达率存在显著性差异［6］. 我们的研究也表明, PTEN蛋白的表达与RB的组织分化程度呈正相关:组织分化程度高、恶性程度低者,PTEN蛋白表达的阳性率高;而PTEN蛋白失表达则多见于组织分化程度低、恶性程度高者. 这可能是因为PTEN基因的失活导致其磷酸酶活性丧失,使其下游分子Shc过度磷酸化,间接激活了丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路. 目前RB组织PTEN蛋白失表达的原因尚未明确. 我们认为,PTEN蛋白的低表达或失表达在RB的发生、发展中可能发挥重要作用,并有可能成为RB治疗的新靶点,为早期协助诊断、判断预后及指导治疗提供依据. 但由于RB的发生、发展是个复杂的过程,关于PTEN蛋白对RB发生、发展的影响的确切机制还有待于进一步研究.
【参考文献】
［1］ Li J, Yen C, Liaw D, et al. PTEN a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain, breast, and prostate cancer ［J］. Science, 1997;275(5308):1943-1947.
［2］ Tsugawa K, Jones MK, Sugimachi K, et al. Biological role of phosphatase PTEN in cancer and tissue injury healing［J］. Front Biosci, 2002;7(5):E245-E251.
［3］ Parsons R, Simpson L. PTEN and cancer［J］. Methods Mol Biol， 2003；222(3):147-166.
［4］ 付洛安,章翔,李侠,等. PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG44细胞凋亡及bcl2表达下调［J］. 第四军医大学学报，2002;23(8):681-684.
Fu LA, Zhang X, Li X, et al. PTEN gene induces apoptosis and downregulation of expression of bcl2 in SHG44 cells［J］. J Fourth Mil Med Univ，2002;23(8):681-684.
［5］ Davies MA, Koul D, Dhesi H, et al. Regulation of AKT/PKB action, cellular growth, and apoptosis in rostate carcinoma cells by MMAC/PTEN［J］. Cancer Res, 1999；59(11):2551-2556.
［6］ 马佳佳，陈必良，马向东，等. 抑癌基因PTEN在子宫内膜癌组织中的表达［J］. 第四军医大学学报，2004；25(11):1015-1018. |
