作者：吴惠琴，汪玲，梁厚成，朱秀萍，马强，程燕，赵帅，刘先宁，赵 雅，胡森科
作者单位：（710002）中国陕西省西安市，西安市第一医院1眼科；2检验科；3陕西省眼科研究所；4（710061）中国陕西省西安市，西安交通大学医学院
【摘要】目的：观察解毒明目方药对鼠复发性单纯疱疹病毒性角膜炎（HSK）血清细胞因子(IL6、IL8、IFNα)水平的影响、检测病毒、观察复发情况，来进一步探讨该药物治疗作用机制。方法：用Balb/c小鼠建立潜伏感染模型, 随机分为对照组和治疗组，治疗组使用中药灌胃，对照组使用生理盐水灌胃，两组经紫外线B光（UVB）照射诱导复发后, 角膜刮片检测病毒，处死小鼠取血清检测胞因子（IL6、IL8、IFNα）水平。结果：HSK复发,治疗组角膜炎的发生率较对照组比较有显著差异（P＜0.05)；与对照组比较血清中IL6 （P＜0.05)、IL8（P＜0.01)、IFNα（P＜0.05)。结论：中药解毒明目方可以影响血清中细胞因子（IL6、IL8、IFNα)的水平，使其发挥调整机体免疫功能的作用，可以减轻HSK复发后炎症反应程度。
【关键词】 解毒明目方；单纯疱疹病毒；复发；细胞因子
Treatment of herpes virulent keratitis in disintoxicatingclearvision recipe
HuiQin Wu, Ling Wang, HouCheng Liang, XiuPing Zhu, Qiang Ma, Yan Cheng, Shuai Zhao, XianNing Liu, Ya Zhao, SenKe Hu
Foundation items: Scientfic Research Project of Bureau of Management of Shaanxi Province, China (No. 2005098); Science Research Project Foundation of Xian Health Office (No.2006001)
1 Department of Ophthalmology; 2 Department of Inspection, the First Hospital of Xian City, 3 Shaanxi Provincial Ophthalmologic Institute, Xian 710002, Shaanxi Province, China;4 Medical School of Xian Jiaotong University, Xian 710061, Shaanxi Province, China
Correspondence to: HuiQin Wu. Department of Ophthalmology, the First Hospital of Xian City, Xian 710002, Shaanxi Province, China. [email protected]
AbstractAIM: To explored the treatment of disintoxicatingclearvision recipe in the recurrence herpes virulent keratitis (HSK) by detected the level of the cell factor (IL6, IL8, IFNα) in serum in model of mouse, and to discuss its mechanism.METHODS: We established the incubationary carrier model with the Balb/c mouse and randomly divided them into the control group and the treatment group. The mice in the treatment group were given Traditional Chinese Medicine from stomach while the controls given NS. Both groups were induced recurrence by the ultraviolet ray B. The virus was checked in the cornea blow the piece examination, and the level of cell factor (IL6, IL8, IFNα) were measured in serum.RESULTS: In our study, the incidence of interstitial keratitis in the treatment group was statistically lower than that of the control group (P<0.05). There were significant differences in IL6 (P<0.05), IL8 (P<0.01), IFNα (P<0.05) compared with the controls.
CONCLUSION: Traditional Chinese Medicine disintoxicatingclearvision can change the cell factors (IL6, IL8, IFNα) in serum, and plays a regulatory role in immune function and reduces inflammation in the recurrence of HSK. KEYWORDS: disintoxicatingclearvision recipe; herpes simplex virus; recurrence; cell factor
0引言
HSK是一种常见的致盲眼病,其发病率和致盲率均占角膜病的首位。且病程迁延,易反复发作,给患者躯体及精神造成严重伤害。我们通过复方制剂解毒明目方对HSK血清细胞因子水平影响的实验研究，观察解毒明目方在抗病毒、缩短病程、减轻症状方面的作用，进一步探讨其治疗作用机制。
1材料和方法
1.1材料
25只Balb/c小鼠4~6周龄，雌雄各半，体质量18~22g，右眼滴表面麻醉剂盐酸奥布卡因滴眼液（日本参天株式会社生产）10s后，用11＃刀片角膜表面“#”字划痕，滴入HSV1悬液5μL（SM44毒株，效价105TCID 50,
中科院北京病毒所），保留30s。第3d开始观察角膜病变情况，小鼠右眼点阿昔洛韦眼药水1次/d，目的使其不发生角膜永久性损害。4wk后随机抽取5只小鼠,取接种侧结膜囊分泌物及三叉神经节行PCR检测[14],证实潜伏模型建立[5]。
1.2方法
小鼠随机分为治疗组10只和对照组10只，两组各抽取2只小鼠，右眼表面麻醉，角膜刮片，行间接免疫荧光法检测病毒并照相。治疗组使用中药水煎剂灌胃（龙胆草18g、板蓝根30g、蒲公英30g、薄荷6g、黄芩15g、黄芪30g、白术12g、石决明12g、木贼15g、防风10g，1剂煎取200mL,由陕西省人民医院中药制剂室提供），按10mL/kg计算喂药量，1次/d，共10d。对照组使用9g/L氯化钠注射液（陕西济生制药有限公司，批号0802184A）灌胃，喂药剂量及方法同前。灌胃结束既病毒接种后7wk[6,7],小鼠右眼表面麻醉后,暴露于波长为302nm的紫外线（上海顾村光电仪器厂生产）下3min,紫外线透照仪功率为1.4 mW/cm2,小鼠右眼接受的照射强度为250 MJ/cm2。照射后1wk内每天观察角膜病变情况。UVB光照射后第10d，全部小鼠做角膜刮片检测，方法同前。次日断颈处死，心脏取血，静置，离心，取血清，做细胞因子检测（ELISA检测试剂盒由上海亚培生物科技有限公司提供）。
统计学处理：P≤0.05为差异有显著性统计学意义。
2结果
小鼠角膜接种后1wk内均出现角膜急性病变，原发感染确定。点阿昔洛韦眼药水后原发病变于2wk内消失,角膜恢复光滑透明。之后2~3wk内观察小鼠角膜无自发性复发现象出现。UVB光照射后，复发性HSK主要表现为角膜基质炎,裂隙灯显微镜下可见角膜基质混浊及角膜新生血管(表1)。角膜刮片检测病毒UVB光照射前两组角膜刮片未检测到病毒(图1A)，UVB光照射后治疗组刮片有3例检测到病毒（图1B），对照组9例检测到病毒（图1C，D）。两组间 IL6、IL8、IFNα水平的比较(表2)。表1角膜基质混浊及角膜新生血管情况（略）表2两组间 IL6、IL8、IFNα水平的比较（略）
3讨论
HSK的潜伏感染和反复发作可导致失明。小鼠模型在感染后经过一段时间才发生角膜的炎症反应,该特征类似于人类的HSK[1]。本实验经角膜接种HSV1后,原发角膜感染全部成功,并且在潜伏感染期(原发感染后的2~6wk[3,5])没有一例发生HSK自发性复发现象。鼠既易建立起潜伏感染,也不易复发,目前被认为是一个理想的研究HSK复发的实验动物模型[8]。
有证据表明[1],免疫系统在建立潜伏感染的过程中可能起着一定的作用。患者机体细胞免疫功能低下是诱使病毒活化、产生复发的重要原因[9]。细胞因子的生物学作用极其广泛而复杂，它能作为分子信号和介质，结合到细胞受体，单独或协同地参与免疫应答或炎症反应，具有强效的调控免疫功能的作用。许多观察结果都显示体内多种因子的改变，不仅可以灵敏的反映机体免疫功能状况，而且与某些疾病的发病机制有关，它们水平的改变，能间接地反映炎症的程度，可作为观察炎症反应有价值的参考数据。
HSK属于中医“聚星障”、“花翳白陷”范畴，中医药在HSK的防治方面疗效确切，无明显不良反应，有一定的优势。目前复方制剂治疗HSK主要为临床观察，通过实验来探讨疗效作用机理却多为单味中药。而临床治疗上多使用复方制剂，疗效显著。本实验方剂中龙胆草、板蓝根、蒲公英、薄荷、黄芩、黄芪、白术、石决明、木贼等共同组方，发挥清热解毒，健脾益气，明目退翳之功效。现代药理研究也证明方中板蓝根、蒲公英有抗病毒、抗菌作用；薄荷中所含黄酮类和鞣质有利于减少炎性渗出和促进炎性渗液的吸收，又可止痛；黄芪不仅能增强吞噬细胞吞噬功能，而且能提高细胞对干扰素敏感性，促进病毒诱生干扰素能力，提高机体抗病毒和清除潜伏病毒能力，降低疾病复发。近年来关于HSK的中西医结合的研究结果认为气虚邪盛在HSK发生的发病机制中居于重要地位，辨证中无论证属肝经风热、肝胆湿热、气阴两虚等，气虚邪盛仍是最基本的发病机制。解毒明目方具有清热解毒、健脾益气、明目退翳的功效，符合HSK的辨证原则。大量报道显示中药治疗HSK,不但能提高疗效,而且能缩短疗程, 降低复发[1014]。本实验也显示出解毒明目方在抗复发、减轻症状方面的优势。
中药在调整机体免疫机能、扶正祛邪方面的优势，近年来已受到眼科界人士的重视。本实验结果反映出解毒明目方可以影响某些细胞因子的水平，使其发挥调整机体免疫机能的作用，减轻HSK复发后炎症反应程度，是其影响小鼠免疫细胞分泌细胞因子，还是由于中药直接作用于炎症细胞，调节细胞因子的分泌，目前尚不清楚，有待进一步研究。在用药的时间和时机方面也需更进一步研究。
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