角膜结膜及泪器病             3125                                      PO0387

　　兔角膜基质细胞培养在羊膜上保持细胞表型的实验研究

　　林旭明 赵靖 史伟云

　　山东省眼科研究所 266071

　　目的：探讨兔角膜基质细胞在羊膜上及低血清或无血清培养基上培养时，保持角膜基质细胞原有表型及细胞特异性蛋白表达，以获得合适的组织工程角膜种子细胞的培养条件。

　　方法：采用消化培养法将兔角膜基质细胞分别种植于羊膜及塑料培养板上，分别加入不同血清浓度的培养基培养，细胞在不同条件下原代生长后分别观察细胞形态的变化，检测角膜基质细胞特异蛋白keratocan的mRNA表达的情况，比较表达的特异蛋白keratocan的mRNA的差别；将80%融合的细胞传代培养。分别检测传代后在不同的培养条件下角膜基质细胞特异蛋白keratocan的mRNA表达的情况。比较不同的培养条件下角膜基质细胞所表达的特异性标志物的差别。

　　结果：羊膜上培养的细胞无论原代或是传代的细胞，在不同的血清浓度中均表达角膜基质细胞特异性蛋白keratocan的mRNA。在塑料培养板上培养时，含有10%胎牛血清的培养基条件下，仅原代时表达角膜基质细胞特异性蛋白keratocan的mRNA，传代的细胞基本不表达；在低血清或无血清培养基条件下，原代与传代的细胞中均有keratocan的mRNA表达。

　　结论：羊膜可以保持培养的角膜基质细胞的原有特性，低血清或无血清培养基条件下也有利于维持角膜细胞的表型。因此无血清或低血清培养基条件下，羊膜作为载体可以获得保持细胞原来表型的组织工程角膜种子细胞。

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