蔡春梅

牡丹江医学院附属红旗医院157000

目的：观察携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的腺病毒，感染体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium ， RPE)细胞，评价腺病毒对人RPE细胞的感染能力及其对细胞的毒性，为视网膜病变的基因治疗奠定基础。

方法：采用酶辅助显微分离法分离培养人RPE细胞，并用细胞角蛋白和S-100为一抗进行免疫组化鉴定，用腺病毒介导的绿色荧光蛋白转染RPE细胞。用MTT法检测腺病毒载体对RPE细胞毒性。用流式细胞仪检测腺病毒对人RPE细胞的转染效率。

结果：体外分离培养的人RPE细胞，用细胞角蛋白和S-100免疫组化染色阳性。携带GFP的腺病毒能够感染体外培养的RPE细胞，GFP基因可持续在RPE细胞内表达。MOI=1、10时，腺病毒对细胞无毒性。当MOI=1、10、102、103时，流式细胞仪检测Ad-GFP对体外培养的RPE细胞的转染效率分别为50.54%、51.56%、 100%、100%。

结论：采用酶辅助显微分离法可获得纯化的人RPE，腺病毒能够简便、快速、稳定将目的基因转入RPE细胞，可望成为眼底病变基因治疗介导目的基因转移的重要工具。

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