3　讨论

　　3.1　培养液的选择及其意义　近10a来国外开展CPE细胞培养选用的培养液主要有：DMEM、F12、F10、M199、RPMI-1640、DMEM、L-15加入不同浓度的小牛血清可以培养出多种动物的CPE［3～5］，但成功率(54%)不高。因培养的CPE为贴壁生长而非悬浮生长，故本实验采用测定组织片生长面积方法来观察细胞生长情况。该方法与氚标放射测定相比，不仅可以测定细胞的增殖，而且还可以观察细胞的移动能力。曲线表明：CPE细胞在RPMI-1640培养液中生长移动最快。该培养液起初是针对淋巴细胞设计的，含有全部的必需氨基酸且含量较高，细胞合成核酸和蛋白质的谷氨酰胺含量也较高，能适用多种细胞培养的要求。用DMEM培养CPE时，细胞生长仅次于RPMI-1640，其生长形态呈上皮样居多。DMEM同RPMI-1640一样具有成分简单的特点，含有高糖和高浓度的谷氨酰胺，可能对合成维持细胞形态的骨架系统有利。F12氨基酸成分含量少，增加了Cu2+，Zn2+等一些微量元素，观察表明对该细胞的生长并无促进作用。DMEM与F12的等量混合培养液只在早期对CPE具有一定的生长刺激作用。M199是问世最早，含有69种复杂成分的培养基，但其比例并不适合CPE生长的要求，观察结果效果最差［6］。

　　3.2　CPE细胞培养前后形态变化的意义　培养后的CPE最显著的变化是黑色素减少，可能是培养液中某些营养物质的缺乏或细胞本身酪氨酸蛋白激酶活性降低所致［7］。培养后的CPE平均直径增加，具有丰富的细胞器，表明细胞功能活跃。

　　培养前后的CPE细胞均可见到桥粒连接、缝隙连接和相似的微绒毛，且已有实验证明培养的CPE具有与青光眼密切相关的碳酸酐酶及其同功酶系统［8］，因此本实验培养液的选择和形态观察将有助于CPE的体外高效培养和促进房水分泌等基础研究。

　　参考文献

　　1　Helbig H,Korbmacher C,Nawrath M,et al.Sodium bicarbonate cotransport in cultured pigmented ciliary epithelial cells.Curr Eye Res 1989；8∶595-598.

　　2　熊新春，杜蜀华，张　泺.人、兔睫状色素上皮细胞的体外培养.眼科 1994；3(2)∶114-117.

　　3　Kondo K,Coca-Prados M,Sears ML.Ciliary epithelial of the mammalian eye in cultured explant.Cell Tissue Res 1983;233∶629-638.

　　4　Helbig H,Korbmacher C,Wohlfarth J,et al.Electrogenic Na+-ascorbate cotransport in cultured bovine pigmented ciliary epithelial cells.Am J Physiol 1989;156∶44-49.

　　5　Runyan TE,Mccombs WB,Holton CD,et al.Human ciliary body epithelial in culture.Invest Ophthalmol Vis Sci 1983;24∶687-696.

　　6　鄂征.组织培养和分子细胞学技术.第2版.北京：北京出版社 1997∶28-31.

　　7　Helbig H.K+ conductance and electrogenic Na+/K+ transport of cultured bovine pigmented ciliary epithelium.J Membrane Biol 1987;99∶173-186.

　　8　Helbig H,Korbmacher C,Erb C,et al.Coupling of 22　Na and 38　Cl uptake in cultured pigmented ciliary epithelial cells:a proposed role for the isoenzymes of carbonic anhydrase.Curr Eye Res 1989;8∶1111-1119.

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